Определение содержания триацилглицеринов в сыворотке крови

Колориметрическим методом (Gottfried, Rosenberg, 1973)

Принцип метода. Триацилглицерины экстрагируют из сыворотки. Освобожденный в результате щелочного гидролиза глицерин окисляют с помощью метаперйодата натрия до формальдегида, который даёт с ацетилацетоном соединение 3,5-диацетил-1,4-дигидролютидин. Интенсивность окраски последнего пропорциональна содержанию ТАГ.

Реактивы

1. Гептан.

2. Изопропиловый спирт.

3. Серная кислота, 0,04 моль/л. 2,2 мл концентрированной серной кислоты доводят до 1л дистиллированной водой.

4. Раствор едкого кали, 6,25 моль/л. 17,5 г КОН растворяют в 50 мл дистиллированной воды.

5. Перйодатный реактив. 0,6 г натрия йоднокислого мета (NаIO₄) вносят в 100 мл раствора уксусной кислоты (50 г/л).

6. Раствор ацетата аммония, 2 моль/л. 154 г уксуснокислого аммония растворяют в небольшом количестве дистиллированной воды и доводят ею объём до 1 л.

7. Ацетилацетоновый реактив. 1,5 мл ацетилацетона доливают до 200 мл 2 моль/л раствором ацетата аммония.

8. Стандартный раствор триолеина, 2,2 ммоль/л. В мерную колбу на 100 мл вносят 200 мг триолеина и доливают изопропиловый спирт до метки.

Ход определения. К о,5 мл сыворотки крови добавляют 2,0 мл гептана, 3,5 мл изопропилового спирта и 1,0 мл раствора серной кислоты. Содержимое пробирки тщательно перемешивают в продолжение 20 с, оставляют стоять в течение 5 мин и центрифугируют 10 мин (при 3000 об/мин на центрифуге типа ОПН-3).

К 0,4 мл верхнего слоя жидкости приливают 2,0 мл изопропилового спирта и 1 каплю раствора КОН. Содержимое пробирки перемешивают на протяжении 15 с. Затем её закрывают пробкой и нагревают на водяной бане в течение 10 мин при 70˚С. После охлаждения добавляют по 0,2 мл перйодатного и 1,0 мл ацетилацетонового реактивов, все перемешивают, закрывают пробкой и снова нагревают в течение 10 мин на водяной бане при 70˚С. Измеряют оптическую плотность пробы на ФЭКе с синим (фиолетовым) светофильтром (длина волны 410 – 430 нм) в кювете с шириной слоя 5 мм. Результаты сравнивают с контрольной пробой.

Контрольную пробу ставят также, как и опытную, но вместо сыворотки берут 0,5 мл дистиллированной воды.

Стандартную пробу проводят также как и опытную, но вместо сыворотки используют 0,5 мл стандартного раствора.

Расчёт производят по формуле:

С_оп (ммоль/л) = А_оп: А_ст · 2,3,

где 2,3 – величины ТАГ в стандартном растворе (ммоль/л).

Клинико-диагностическое значение определения