Работа № 2. Цветные реакции на соединения, относящиеся к обмену аминокислот. Открытие индикана и фенилпировиноградной кислоты в моче

Теоретическая часть.

Индикан (индоксил серная кислота) является метаболитом триптофана: в толстом кишечнике под воздействием ферментов микрофлоры триптофан превращается в токсичное соединение - индоксил, который поступает по воротной вене в печень, где соединяется с серной кислотой. Индоксил серная кислота (индикан) выделяется через почки с мочой. В моче здорового человека индикан содержится в незначительных количествах. Индиканурия наблюдается при: использовании диеты с высоким содержанием белка, усиленном росте бактерий в ЖКТ, длительных запорах, колите, перитоните, разрушении бактериями тканевого белка и гнойных экссудатах (гангрена, гнойные процессы в легких и т.д.). Определение индикана в моче проводится по специальному требованию врача.

Фенилпировиноградная кислота (ФПК) образуется в результате дезаминирования фенилаланина. Наследственное нарушение превращения фенилаланина в тирозин (фенилкетонурия, ФКУ) сопровождается образованием больших количеств ФПК. Причина ФКУ - врожденная недостаточность фермента – фенилаланингидроксилазы, которая катализирует реакцию гидроксилирования фенилаланина в тирозин. Экспресс-диагностика ФКУ у новорожденных детей имеет важное значение для начала своевременного лечения с целью предупреждения развития умственной отсталости.

Практическая часть.

Провести цветные реакции на индикан и ФПК, оформить протокол:

1. Название работы.

2. Название реакции.

3. Принцип метода.

4. Результаты записать в таблицу:

4. Сделать вывод.

Открытие индикана в моче. Реакция Обермейера.

Принцип метода. При воздействии HCl индикан превращается в индоксил, который окисляется в синее индиго в реакции с хлоридом железа. Ход работы. Работа выполняется в вытяжном шкафу! В пробирку помещают 2 мл мочи, добавляют: 2 мл раствора ТХУ, 7 капель тимола, 3 мл Реактива Обермейера (0,4 г FeCl₃ x 6H₂O в 100 мл конц. HCl), 1 мл хлороформа. Пробирку тщательно закрывают заранее подобранной пробкой, после чего содержимое интенсивно встряхивают. При наличии индикана хлороформ в нижней части пробирки окрашивается в фиолетовый цвет. После завершения работы раствор их пробирки сливают в специальную емкость в вытяжном шкафу!