Лабораторная работа: 1. Обнаружение кетоновых тел

Проба Ланге. В пробирку налить 2-3 мл мочи (сыворотки), 1 мл ледяной уксусной кислоты и 0,5 мл 5% раствора нитропруссида натрия, затем осторожно наслоить 2 мл раствора аммиака. Появление фиолетового кольца указывает на наличие кетоновых тел.

Обнаружение ацетоуксусной кислоты в моче. К 5 мл мочи прибавить по каплям 5% раствор хлорного железа – выпадает осадок. При наличии ацетоуксусной кислоты дальнейшее добавление хлорного железа ведет к появлению винно-красного окрашивания, постепенно бледнеющего при стоянии вследствие самопроизвольного декарбоксилирования ацетоуксусной кислоты.

В протоколе указать следующее: какие вещества относят к кетоновым телам; что является субстратом их образования; какой продукт образуется при декарбоксилировании ацетоуксусной кислоты; назвать состояния, которые могут сопровождаться кетонемией и кетонурией; объяснить механизмы возникновения.

Лабораторная работа 2. Количественное определение ЛПНП.

1. Количественное определение липопротеинов низкой плотности (ЛПНП) в сыворотке крови имеет клинико-диагностическое значение, так как количество ЛПНП крови связано с гиперхолестеринемией, поскольку холестерол входит главным образом в состав этой фракции. Увеличение содержания ЛПНП (гиперлипопротеинемия IIа, IIб и III типов) наблюдается при атеросклеротическом поражении сосудов. Нормальное содержание ЛПНП в сыворотке крови: 3,5 –5,8 г/л

Принцип метода: в присутствии хлорида кальция гепарин избирательно осаждает ЛПНП. Интенсивность образующегося помутнения пропорциональна их содержанию.

Ход работы: в пробирке №1 (опыт) смешивают 2 мл 0,277 % раствора СаСl₂, 0,2 мл исследуемой сыворотки и 0,04 мл 1% раствора гепарина.

В пробирке №2 (контроль) смешивают 2 мл 0,277% раствора СаСl₂, 0,2 мл исследуемой сыворотки и 0,04 мл дистиллированной воды. Тщательно смешивают и через 4 минуты измеряют оптическую плотность помутневшей опытной и контрольной проб на фотоэлектроколориметре в кювете с толщиной оптического слоя 5 мм при красном светофильтре против воды. Расчет осуществляется по формуле А = (Е_о - Е_к) х 10, где

А – концентрация ЛПНП, г/л;

Е_о - экстинция опытной пробы;

Е_к - экстинкция контрольной пробы;

10 – коэффициент пересчета.

Оформите результаты в виде протокола. Сравните с нормой. Выскажите предположения о состоянии липидного обмена.

Используя учебник и лекции, выполните следующее:

1. Установите соответствие.

Продукты гидролиза ТАГ:

1.Глицерол. 2. Жирные кислоты.

Использование в тканях:

А. Активируется с участием HS-KoA.

Б.Превращается в печени в глицерол-3-фосфат.

В. Фосфорилируется в жировой ткани под действием глицеролкиназы.

Г. Участвует в реакции, катализируемой ацилтрансферазой.

Д. Транспортируется в крови в составе ХМ.

2. Выберите правильные ответы: Синтезированная в печени пальмитиновая кислота:

А. Используется на построение линолевой кислоты;

Б. В абсорбтивный период окисляется в печени до ацетил-КоА.

В. Используется на построение фосфолипидов.

Г. Превращается в арахидоновую кислоту.

Д. Участвует в синтезе ТАГ.

3. Выберите правильные ответы: Продукты, синтезированные в печени с использованием пальмитиновой кислоты (смотри тест 2):

А. Остаются в печени.

Б. Участвуют в построении мембран.

В. Включаются в состав ЛПОНП.

Г. Сгорают в ЦТК.

4.Составить схему, иллюстрирующую связь метаболизма углеводов и липидов в тканях(используйте при этом схему «Метаболизм углеводов», построенную ранее). В схеме покажите метаболические пути углеводов: основной, и пентозофосфатный, пути мобилизации гликогена; метаболические пути липидов - тканевой липолиз, превращение глицерина и ВЖК. Стрелками укажите взаимосвязи через общие метаболиты. Укажите также регуляторные ферменты и их эффекторы.

5.Заблокирована реакция окислительного декарбоксилирования пировиноградной кислоты. Как изменится интенсивность ß-окисления ВЖК и почему; какие продукты и почему появятся в крови? Ответ аргументировать.

6. Рассчитать энергетический эффект полного окисления следующего соединения: сн₂-о-со-сн₃

|

сн –о-со-сн₃

|

сн₂-о-со-сн₃

7. В крови и моче резко повысилось содержание ß-гидроксибутирата и ацетоуксусной кислоты. Какие данные необходимы для уточнения причин их появления?

8. Сравните свойства липаз, участвующих в обмене жиров в организме человека и установите соответствие:

а. Расщепляет экзогенные жиры;

б. Расщепляет жиры в составе ХМ и ЛОНП;

в. Активируется адреналином и глюкагоном;

г. Активность зависит от присутствия желчи;

д. Локализованы в эндотелии кровеносных сосудов;

е. Локализовано в адипоцитах

А. Панкреатическая липаза; Б. Тканевая липаза; В. Липопротеидлипаза; Г.Свойственно всем типам липаз; Д. Не свойственно ни одному типу

9. Какие из перечисленных ниже процессов активируются при длительном голодании: а. липолиз в жировой ткани; б. бета- окисление в печени;

в. синтез кетоновых тел в печени; г. окисление кетоновых тел в нервной ткани;

­ д. окисление кетоновых тел в мышцах; е.глюконеогенез; ж. окисление

углеводов; з. синтез фосфолипидов

10. Сравните действие инсулина и глюкагона на жировой обмен и установите соответствие:

а. Вырабатывается при повышении концентрации глюкозы в крови;

б. Вырабатывается при снижении концентрации глюкозы в крови;

в. Повышает скорость депонирования жира;

г. Повышает скорость мобилизации жира;

д. Активирует липопротеинлипазу;

е. Активирует триацилглицероллипазу жировой ткани;

ж. Действует посредством аденилатциклазной системы.

А. только инсулин; В. только глюкагон; С. Оба гормона;