Изолирование барбитуратов подщелоченной водой. (П. Валова)

Ход изолирования. В стакан или в коническую колбу вносят 100 г измельченного биологического материала, прибавляют 180 мл воды и 20 мл 10 %-го раствора гидроксида натрия. Содержимое стакана (или колбы) оставляют на 30 мин при частом перемешивании, а затем центрифугируют в течение 30 мин (3000 об/мин). От осадка отделяют надосадочную жидкость (центрифугат), к которой прибавляют 120 мл 10 %-го раствора вольфрамата натрия и 1 н. раствор серной кислоты (до pH = 2). Жидкость нагревают на кипящей водяной бане в течение 20 мин, а затем подвергают центрифугированию (30 мин). Центрифугат сливают с осадка и процеживают через ватный тампон, смоченный водой. Процеженную жидкость собирают в делительную воронку. Тампон промывают водой (10 мл). Промывную воду тоже выливают в делительную воронку. К процеженной жидкости прибавляют равный объем диэтилового эфира и взбалтывают в течение 15 мин. Эфирный слой отделяют и взбалтывают с 50 мл 10 %-го раствора гидроксида натрия. Щелочной водный слой отделяют, подкисляют 25 %-м раствором серной кислоты до рН = 2 и взбалтывают с равным объемом диэтилового эфира. Полученную при этом эфирную вытяжку используют для обнаружения барбитуратов.

Выбор методики изолирования зависит от цели исследования, стадии распределения искомого вещества, количества и характера представленного для исследования биологического материала.

ОБНАРУЖЕНИЕ ВЕЩЕСТВ

Тонкослойная хроматография

Сущность метода: Назначение описываемой ниже схемы — получить как можно больше информации в кратчайший срок с минимальным объемом образца. Экстракты анализируют методом тонкослойной хроматографии (ТСХ) на одной пластинке с использованием одного растворителя. Щелочной экстракт в процессе выпаривания окисляют, чтобы свести к минимуму потери летучих оснований, например амфетаминов. Хотя флюоресцирующие соединения, например хинин, можно обнаружить посредством простого изучения хроматограммы в ультрафиолетовом свете (254 и 366 нм), использование некоторых реактивов для опрыскивания (в целях визуализации) увеличивает диапазон анализа и достоверность идентификации.

Экстракты могут включать жиры, что значительно затрудняет хроматографический анализ, поэтому может потребоваться очистка образца путем повторной экстракции в водную кислоту или щелочь.