Лабораторная работа № 13

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ БЕЛКА

МЕТОДОМ БРАНДЕРБЕРГА-РОБЕРТСА-СТОЛЬНИКОВА

(МЕТОДОМ РАЗВЕДЕНИЯ)

Ц е л ь р а б о т ы - определить содержание белка в растворе (или водной вытяжке из мышечной ткани) методом разведения.

Метод основан на реакции Геллера - осаждении белка азотной кислотой.

При наслоении раствора белка на концентрированную азотную кислоту или реактив Ларионовой наблюдается образование белого кольца на границе фаз между 2-й и 3-й минутамипосле контакта при условии, что содержание белка 0,033 г/л раствора.

Оборудование, реактивы:

Пробирки; HNO₃ (50%-й раствор); белок (0,01%-й раствор, что соответствует содержанию белка»0,1 г/л); водная вытяжка из мышечной ткани.

Порядок выполнения работы:

Берут пять пробирок, наливают в каждую по 2 мл воды дистиллированной. В первую пробирку наливают 2 мл исходного раствора белка. Далее методом разведения готовят остальные четыре раствора. Для этого из первой пробирки берут 2 мл смеси, помещают во вторую пробирку, перемешивают. Потом из второй пробирки отбирают 2 мл жидкости и помещают в третью пробирку и т.д. Таким образом, реализуют разведение исходного раствора в 2, 4, 8, 16, 32 раза.

Берут следующую партию из пяти чистых пробирок, наливают в каждую по 1 мл 50%-го раствора HNO₃ или реактива Ларионовой. В каждую пробирку с HNO₃ осторожно, по стенке, наслаивают растворы белка из первых пяти пробирок. Отмечают, в какой пробирке между 2-й и 3-й минутами появилось белковое кольцо.

Расчетная формула: Х(белка) = 0,033 Р,

где Х(Б) - содержание белка в исходном исследуемом растворе; 0,033 - содержание белка для той пробы, где появилось белковое кольцо, г/л; Р - разведение.

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 14

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОБЩЕГО АЗОТА

В БИОЛОГИЧЕСКОМ МАТЕРИАЛЕ