2015-01-07
1253
Задача 1. Токсическое действие аммиака на клетки мозга объясняется, в частности, нарушением образования нейромедиаторов. Синтез какого из известных Вам нейромедиаторов будет нарушен в первую очередь?
Задача 2. Если препарат скелетной мышцы обработан смесью йодацетата (ингибитор глицеральдегиддегидрогеназы) и ротенона (ингибитор цепи переноса протонов и электронов), то мышца теряет способность сокращаться в ответ на электростимуляцию. Если препарат скелетной мышцы обработан только ротеноном, то способность к сокращению сохраняется. Объясните результаты.
Подготовьте к предстоящему занятию протокол лабораторных работ: выпишите кратко принципы методов и техники их выполнения, показатели нормы, оставляя место для расчетов и выводов.
Самостоятельная работа студентов
Работа № 1. Выделение гликогена из мышечной ткани.
Принцип метода. При экстракции используется способность гликогена к растворению в кислой среде. Применение трихлоруксусной или хлорной кислот в качестве экстрагирующего агента одновременно с выделение гликогена дает возможность освободить раствор от примесей белков, нуклеиновых кислот и других полимеров. Гликоген, подобно белкам, обладает резко выраженными гидрофильными свойствами, поэтому его можно легко осадить из раствора путем высаливания солями щелочных и щелочно-земельных металлов, солями тяжелых металлов, этиловым спиртом.
|
|
|
Ход работы. Забить животное, быстро выделить 5 г мышечной ткани и поместить в фарфоровую ступку, вмороженную в лед. Ткань измельчить, залить 2 мл 5% раствора трихлоруксусной кислоты (ТХУ) и растереть пестиком. Добвить еще 3 мл 5% раствора ТХУ и вновь тщательно растереть пестиком. Полученную кашицу отцентрифугировать при 3000 об/мин, после чего перенести в 2 пробирки по 1 мл надосадочной жидкости. С одной из пробирок провести йодную пробу на гликоген, добавив 2-3 капли реактива Люголя. Отметить появление характерной красно-бурой окраски раствора. Во вторую пробирку прилить 1 мл 10% раствора ацетата свинца и отметить выпадение осадка.
