Метод агаровых блоков

Метод агаровых блоков чаще всего применяется при изучении антагонистических свойств микроорганизмов. Его преимуществом является возможность культивирования микроорганизмов-антагонистов и тест-культур на разных по составу плотных питательных средах. Исследуемый на антагонистическую активность микроорганизм засевают на поверхность агаризованной среды в чашке Петри так, чтобы в процессе роста сформировался сплошной газон. Для этого можно использовать, к примеру, суточные культуры бактерий или дрожжей, споровые суспензии мицеллиальных грибов или актиномицетов (бактериологической петлей споры переносят в 1 мл стерильной воды), распределяя по 0,1–0,2 мл этих суспензий шпателем по всей поверхности среды. Посевы инкубируют при подходящей температуре 8–10 суток.

Затем стерильным пробочным сверлом (диаметр 6–8 мм) из слоя среды вырезают агаровые блоки и переносят их на поверхность агаризованной среды, только что засеянной тест-организмом. Тест-организм в виде суточной культуры чаще также засевают шпателем на поверхность плотной среды (метод Коха), но для улучшения диффузии антимикробного вещества можно использовать и глубинный посев в полужидкую агаризованную среду. Агаровые блоки размещают ростом (газоном) вверх, на равном удалении друг от друга и от краев чашки, плотно прижимая к агаровой пластинке. На агаровой пластинке в одной чашке Петри можно разместить 4–5 агаровых блоков с различными продуцентами антимикробных веществ.

Посевы выдерживают в течение 1 часа при комнатной температуре для диффузии антимикробных веществ в агар, а затем помещают в термостат для инкубирования тест-культур. Если тест-культура чувствительна к антимикробному веществу, которое продуцирует микроб-антагонист в составе агарового блока, то после инкубирования вокруг этого блока сформируется зона задержки (ингибирования, отсутствия) роста. Чем больше выделяется антимикробного вещества и чем оно активнее, тем будет больше ширина зоны задержки роста тест-организма. Тест-культура, не чувствительная к антимикробному веществу данного продуцента, растет в непосредственной близости от агарового блока продуцента.

Данный метод позволяет в одной чашке Петри исследовать чувствительность одной тест-культуры по отношению к нескольким антагонистам в составе агаровых блоков. Однако при необходимости можно модифицировать условия эксперимента с тем, чтобы получить возможность определения чувствительности нескольких тест-организмов по отношению к одному антагонисту. Для этого, например, в центр агаровой пластинки в чашке Петри помещают агаровый блок с газоном антагониста (ростом вверх), а через 30–60 минут (это время необходимо для диффузии антимикробного вещества в агар) по радиусам равномерными штрихами подсевают тест-культуры [19].