Приготовление, красок для пропитки бумажек

1. Для окраски по Граму: 1 г генциан (кристалл- или метил-) виолета растворяют в 100 мл 96⁰-ного этилового спирта, добавляют 5 мл нейтрального глицерина, смешивают и фильтруют через бумагу. Хранят в темной, плотно за­крытой посуде.

2. Фуксина основного 2 г, спирта этилового 96⁰-ного 100 мл, глицерина нейтрального 1 мл. Готовят так же.

3. Карбол-фуксин Циля. К 100 мл обычно приготовленной краски прибавляют 2 мл нейтрального глицерина и перемешивают.

4. Метиленовой сини 1 г, спирта этилового 96⁰-ного 100 мл, глицерина нейтрального 1 мл. Готовят, как и раствор генцианвиалета.

5. Малахитовой зелени 5 г, воды дистиллированной горячей 100 мл, глицерина нейтрального 5 мл.

Приготовление мазков. Мазки (отпечатки) из экспертизного материала делают сразу же после посевов.

На чистых прозрачных, хорошо обезжиренных и профламбированных пред­метных стеклах с нижней стороны восковым карандашом обводят нужное число кружков размером с копеечную монету, не более трех на одном стекле, и мар­кируют их. В этом случае препараты можно будет фиксировать только над пла­менем или на мостике, наливая фиксатор на стекла. При наличии стекол с матовым шлифом по узкому краю маркировку условным порядком делают графит­ным карандашом на шлифе. Такие препараты можно фиксировать и в кюветах, после чего площадь каждого мазка с тыльной (стороны обводят восковым карандашом).

Мазки из органов. Поверхность органа в патологически измененном участке прижигают раскаленным шпателем. Стерильным скальпелем делают разрез, соскабливают немного пульпы и переносят в каплю физиологического раствора на запасном предметном стекле. Затем бактериологической петлей готовят сус­пензию и делают мазки.

Отпечатки из органов делают, прикладывая поверхность свежего среза к стеклу. Они должны быть тонкие, поэтому надо сперва получить пробные от­печатки на запасном стекле.

Мазки из крови. Кровь из сердца или нитрированную кровь из пробирки (после перемешивания) набирают пастеровской пипеткой. Небольшую каплю наносят на предметное стекло, не касаясь его пипеткой, остаток крови высе­вают в бульон и на косой агар (см. культивирование бактерий), после чего ка­пилляром той же пипетки, держа ее плашмя, делают из капли крови мазок.

Жидкую слизь, сперму набирают пастеровской пипеткой, наносят небольшую каплю на стекло и петлей делают мазок. Из огня и других полужидких материалов предварительно готовят суспензию, а из нее - мазки, Сгустки слизи и другие, плохо суспендируемые материалы наносят на предметное стекло ближе к краю и раздавливают их другим стеклом, передвигая его так, чтобы мазки образовались в сторону центров стекол.

Мазки из бульонных культур. Пробирку с культурой встряхивают для получения равномерной взвеси и берут в левую руку между большим и указа­тельным пальцами. Бактериологическую петлю берут, как карандаш, в первые три пальца правой руки и флам6ируют ее, проводя через пламя горелки, петлю нижнюю половину петледержателя. Мизинцем захватывают пробку пробирки и прижимают к ладони. Вблизи пламени, вращая, вынимают пробку, края пробирки выше, чтобы перекалить ее. Петлю охлаждают о стенку пробирки, забирают ею культуру и вынимают, не проводя через огонь. Быстро закрывают над пламенем пробирку и делают мазок. Капля должна равномерно, распределится в пределах отмеченного кружка. Мазок негоден, если культуральная жидкость не смачивают стекло, а собирается в отдельные капли.

Если из одной культуры нужно сделать несколько мазков, то культуру берут из пробирки пастеровской пипеткой и наносят каплю на запасное стекло, а из нее петлей делают мазки.

Мазки из агаровых культур. На чистое приметное стекло наносят каплю физиологического раствора. Из пробирки (чашки) с культурой вышеописанным порядком забирают петлей немного микробной массы и суспендируют в капле до появления помутнения. Остаток микробной массы сжигают на пламени, а мазок высушивают.

Чтобы получить менее густой мазок, готовят таким же способом суспензию на запасном стекле, а из нее делают петлей мазки размером в копеечную мо­нету, после чего стекло с суспензией опускают в дезинфицирующий раствор. Для люминесцентной микроскопии мазки делают из взвесей с малозаметным помутнением (100-200 клеток в поле зрения).

Для приготовления мазков из очень мелких колоний, выросших на чашках среди колоний посторонних микробов, вместо петли пользуются тонкой никелевой иглой, слегка загнутой на конце. Кончиком иглы осторожно забирают из центра колонии немного бактерийной массы, суспендирують ее в маленькой капельке физиологического раствора петлей делают мазки.

Все приготовленные мазки высушивают на воздухе.

Фиксирование мазков. Фиксирование делают для закрепления материала на стекле, обеспложивания микробов, а также дли лучшего окраши­вания тканевых клеток и бактерий.

Наиболее простая фиксация сухим жаром. Для этого стекло, держа мазком вверх, проводят над пламенем горелки 3-4 раза. При этом пальцы руки долж­ны хорошо чувствовать горячие ребра стекла, но не обжигаться. Фиксация жаром применяются для окрашивания по Граму, для выявления бактерий туберкулеза, волютиновых зерен и опор внутри бацилл и в некоторых других случаях.

Общеупотребительные способы фиксирования мазков из культур и из органов: метилотовый аппарат 5 мин, этиловый спирт 15 мин, смесь равных объемов этилового спирта и эфира (жидкость Никифорова) 10-12 мин. При работе с возбудителями особо опасных инфекций мазки фиксируют 4-5%-ным (по объему) раствором формалина в этиловом спирте 15 мин.

Фиксирование спиртами и формалинизированным спиртом ведут на мастиках или в кюветах, а жидкостью Никифорова - только в закрытых кюветах.

Для изучения тонкого строения бактерий мазки из культур фиксируют жидкостью Карнуа (смесь 96⁰-ного этилового спирта 50 мл, хлороформа 30 мл и ледяной уксусной кислоты 10 мл) В течение 15 мин. Если мазки предназначены для окраски по Романовскому, их надо промыть этиловым спиртом для удаления кислоты.