Среды для определения биохимической активности микробов

В микробиологии с целью дифференциации видов и типов бактерий часто бывают необходимо определить их сахаролетические и протеолетические свойства, гемолитическую активность, способность к редукции красок, газообразованию и др. Для выявления этих свойств микробные культуры выращивают на специальных дифференциально-диагностических средах.

Среды для определения ферментации углеводов готовят с цветными индикаторами.

Индикатор Андредэ. 0,5 г кислого фуксина (для бактериологии) растворяют в 100 мл стерильной дистиллированной воды, добавляют 16,4 мл нормального 4%-ного раствора едкого натра и стерилизуют при 0,5 ати 5 мин. Хранят в темном месте. Индикатор служит только для выявления кислотообразования.

Готовая питательная среда после добавления индикатора должна иметь в пробирках соломенно-желтый цвет без розового оттенка; в противном случае растворы краски и щелочи надо предварительно оттитровать. Для этого в 8 пробирок наливают по 5 мл 0,5%-ного раствора кислого фуксина; в первую про­бирку добавляют 0,1 мл 0,4%-ного раствора едкого натра, а в каждую после­дующую на 0,1 мл больше, чем в предыдущую. Пробирки встряхивают и про­сматривают в проходящем свете. При составлении рецепта индикатора берут соотношение фуксина и щелочи, при котором цвет смеси наиболее приближается к соломенно-желтому, а также учитывают, что для титрования брали не 4%-ный раствор щелочи, а разбавленный в 10 раз (децинормальный).

Бромтимолблау (индикатор). 0,4 г бромтимолблау растворяют в 40 мл дистиллированной воды, нагревают до кипения J! добавляют 6,4 мл децинормаль­ного (0,4%-ного) раствора едкого натра. При этом жидкость становится зеленой и прозрачной. Если это не получилось, то добавляют по каплям раствор ще­лочи до позеленения раствора, а затем доводят объем реактива до 100 мл ди­стиллированной водой.

В углеводные среды индикатор добавляют в количестве 1-2%. Нейтраль­ная среда приобретает зеленый цвет, при образовании щелочи она синеет, а при закислении - желтеет.

Среды с углеводами готовят на основе пептонной воды. Мясопептонный бульон сам содержит в себе некоторые углеводы и для данной цели непри­годен.

Среды Андредэ. На 1 л пептонной воды, рН 7,6, асептически добавляют 10 мл индикатора Андредэ и 2,5-5 г того или иного углерода. После его рас­творения среду разливают по 5 мл В пробирки, простерилизованные с поплав­ками, которые помещены в пробирки запаянными концами кверху. Затем сте­рилизуют дробно текучим паром 30 мин 3 дня или однократно при 0,5 ати 25 мин. Засеянная Микробами среда при образовании кислоты постепенно крас­неет за счет восстановления фуксина.

Среды Гисса (с углеводами) имеют тот же состав питательных веществ, что и среды Андредэ. От последних могут отличаться другими индикаторами и име­ют рН 7,4. При отсутствии газоулавливающих поплавков в среды добавляют 0,5% агар-агара. В этом случае о ферментации углеводов судят по образованию пузырьков газа в глубине среды.

Бульон с яичным белком. Свежее куриное яйцо варят вкрутую, снимают скорлупу, в стерильной посуде отделяют белок, нарезают его в виде кубиков 5Х5Х5 мм, кладут в чашку Петри и стерилизуют при 1 ати 20 мин. В сте­рильный МПБ, хоттингеровский или другой бульон кладут пинцетом, соблюдая стерильность, по 2-3 кусочка белка в пробирку.

Для определения протеолитической активности анаэробов кусочки белка:помещают в пробирку со стерильным и прогретым МППБ, после чего на среду наслаивают 1 мл стерильного вазелинового масла и делают посев.

Кровяной агар. К расплавленному и охлажденному до 450 МПА (ДЛЯ кок­ков берут МПА с 1 % глюкозы) добавляют стерильно пипеткой 5-10% стериль­ной дефибринированной крови барана или крупного рогатого скота, перемеши­вают осторожно, чтобы не было пены, разливают в чашки и после застывания выдерживают сутки в термостате для проверки стерильности и подсушивания.

……………………………………………………………………………………………………...

Среды с нитратом. В питательный бульон добавляют 0,2% нитрата калия для 1 варианта пробы на нитраты, или 1 % нитрата калин для II варианта про­бы (см. Изучение биохимических свойств микробных культур). После растворе­ния соли среду разливают в пробирки по 5 мл. И стерилизуют при 1 ати 15 мин.