Возбудители анаэробных инфекций

Среда Китта - Тароцци. Свежую говяжью или лошадиную печень нареза­ют кусочками по 1-1,5 г, добавляют тройное по весу количество нейтрального мясо-пептонного бульона или восьмикратное количество бульона Хоттингера и кипятят 30 мин. Бульон в горячем виде пропускают через бумажный фильтр и устанавливают рН 7,4-7,6. Кусочки печени промывают на сите водой и подсушивают фильтровальной бумагой или чистым полотенцем. В стерильные пробир­ки вносят по три кусочка печени (3-4 г), 8-10 мл бульона и вазелиновое мacло, толщина слоя не менее 1 см. Стерилизуют при 0,5 ати 30 мин.

Глюкозо-кровяной агар Цейсслера. На основе МПБ готовят обычным спосо­бом питательный агар, рН 7,2-7,4, но более плотный, с содержанием 3% агар­-агара (будет добавляться глюкоза в растворе и кровь). Среду разливают в колбы по 100 мл и стерилизуют при 1 ати 30 мин.

По мере надобности агар расплавляют в кипящей водяной бане охлаждают до 48⁰С и добавляют в колбу 2% глюкозы: 10 мл 20%-ного стерильного рас­твора или 5 мл 40%-ного раствора (можно пользоваться медицинской глюкозой в ампулах) и 15-20 мл свежевзятой стерильной дефибринированной крови ло­шади, барана, крупного рогатого скота. Смесь· осторожно перемешивают, не допуская образования пены. Среду разливают в чашки и после застывания вы­держивают в термостате 4-6 ч для подсушивания.

Дефибринированную кровь можно заготовить заранее, но не более чем за 15 дней. Ее разливают в стерильных условиях по 20-25 мл в колбочки и хра­нят на холоду.

При отсутствии 20% -ного раствора глюкозы в ампулах его готовят зара­нее, разливают в колбочки по 15-20 мл и стерилизуют при 0,5 ати 20 мин.

Существуют другие прописи сред с кровью и глюкозой, мало отличающиеся от вышеописанной.

Так, кровяной сахарный агар готовят на основе бульона Хоттингера агар-­агара в нем 2%, а дефибринированной крови барана, крупного рогатого скота или кролика добавляют 10-15 мл на 100 мл среды.

Кровяной сахарный агар Фортнера отличается от среды Цейсслера только тем, что в него добавляют 5-7% крови кролика.

Казеиновая среда по Maтвееву. К 40% по весу гидролизата казеина прибав­ляют 56% дистиллированной воды, перемешивают и нагревают до 80⁰С: До­бавляют 3% а кукурузного экстракта и 0,5% хлорида натрия. Устанавливают рН смеси 7,2 20%-ным раствором едкого натра и кипятят 5 мин. Исправляют рН смеси до 7,2; добавляют по 0,1 % двузамещенного фосфата натрия (Na₂HP0₄··2IH₂0) и однозамещенного фосфата калия (КН₂Р0₄). Смесь перемешивают, ки­пятят 10 мин, а затем фильтруют в горячем виде через полотно, разливают в пробирки и флаконы с комками ваты и стерилизуют при 1 ати 30 мин. Хими­ческие показатели среды: общий азот 250-270 мг %, аминный азот 90-100 мг Приготовление гидролизата казеина. На 100 частей по весу дистиллирован­ной воды берут 8 частей сухого казеина и 1 часть соляной кислоты х. ч. Смесь перемешивают, кипятят 20 мин и автоклавируют при 1 ати 30 мин (для гидро­лиза казеина). Гидролизат выдерживают 3 ч при комнатной температуре, затем 3 суток при 5-8⁰С. При наличии жира его удаляют, прозрачный отстой слива­ют, остаток фильтруют через полотно, фильтрат смешивают с отстоем. Готовый гидролизат консервируют 0,5-1%хлороформа и хранят под резиновой проб­кой, обвязанной бумажным колпачком при 5-8⁰С до 1 года.

Приготовление кукурузного экстракта по Лукиной. К 100 мл 0,2%-ого pacтвopa сульфита натрия (Nа₂SОз) добавляют 50 г кукурузной муки и 1 % хлороформа. Смесь выдерживают в термостате при 45⁰С 18-20 ч для экстра­гирования. Надосадочную жидкость фильтруют через два слоя на во­ронке Бюхнера в колбу Бунзена под небольшим вакуумом. Полученный экстракт ставят в холодильник и употребляют для приготовления казеиновой среды не позже следующего дня.

Среда Вильсона - Блера. К 100 мл расплавленного и охлажденного до 80⁰С щелочного МПА, рН 8,0, с 1-2% глюкозы асептически добавляют Ю мл 20%­ного свежеприготовленного раствора сульфита натрия и 1мл 8%-ного раствора хлорного железа (FеСl_з·6Н₂0). Растворы обеих солей готовят на стерильной дистиллированной воде, а раствор сульфита натрия прогревают текучим паром 1 ч. Приготовленную среду не стерилизуют, разливают по 7-8 мл в пробирки. И оставляют застывать столбиками. Затем выдерживают 1-2 суто,к при 37⁰С для контроля стерильности.

Сульфит натрия в среде можно заменить тиосульфатом натрия – Nа2S2О3·5Н₂О, а хлорное железо - сульфатом железа (FeS04).

Сывороточно-сахарный агар. Основу среды, питательный агар, готовят так же, как для кровяного агара Цейсслера. По мере надобности агара расплавляют в кипящей водяной бане, охлаждают до 48⁰С и асептически добавляют на 100 мл агара 10 мл 20%-ного стерильного раствора глюкозы и 15-20 мл сте­рильной лошадиной или бычьей сыворотки крови. После перемешивания среду разливают в чашки или пробирки. Чашки с застывшим агаром при необходимо­сти подсушивают при 37⁰С.

Молочная среда. Телячью печень режут на кусочки по 1-1,5 г и кипятят в тройном по весу количестве водопроводной воды 30 мин, затем промывают водопроводной водой, подсушивают фильтровальной бумагой, раскладывают в стерильные пробирки по 2-3 кусочка и наливают по 8-10 мл цельного моло­ка. Стерилизуют текучим паром трижды по 20 мин ежедневно.

Вместо печени на 10 мл цельного молока после его стерилизации в каждую пробирку можно добавлять по 1,5-2 мл стерильной сыроватки крови барана или быка.

Мозговая среда. Свежий мозг теленка (не позже 18 ч после убоя) очища­ют от оболочек и пленок и пропускают через мясорубку. Фарш заливают рав­ным по весу количеством водопроводной воды (некислой реакции), перемеши­вают, протирают через сито и кипятят 30 мин, доливая воду до прежнего объ­ема. Устанавливают реакцию массы рН 7,0-7,4. К среде добавляют 5% по объ­ему 1 %-ного раствора сернокислого или хлорного железа, перемешивают, раз­ливают в пробирки и стерилизуют при 0,5 ати 20 мин или текучим паром триж­ды по 20 мин.

Вместо солей железа в. среду можно добавляют кусочки печени, приготов­ленные, как и в предыдущие прописи.

Среды с углеводами по Космодамианскому. К полужидкой пептонной среде (1 % пептона, 0,5% хлорида натрия, 0,5% агар-агара), рН 7,4, после ее расплав­ления добавляют 0,5% нужного углевода и 1 % индикатора Андредэ, переме­шивают и разливают в пробирки по 10-12мл. Стерилизуют при 0,5 ати 30 мин и хранят столбиками. Перед употреблением агар регенерируют в кипящей во­дяной бане 30 мин, охлаждают до 50 С и делают высев в разжиженную среду. О ферментации углевода узнают по сплошному или очаговому покраснению в глубине среды.