Методика определения мышьяка в органах и тканях

Метод основан на фотоколориметрическом выявлении мышьяка. по синей окраске мышьяково-молибденового комплекса (восстановленная форма, молибдоарсената) су отделением от сопутстнующих элементов дистилляцией его из сернокислого раствора.

Содержание аммиака определяют в озоленом материале! Для мокрого озоления берут навеску печени не более; 10-25 г, почек-до 50 г, мышц-50 г1, содержимого желудочно-кишечного тракта до 100 г (в. зависимости от степени отравления животного), пробы других органон и тканей в количестве, содержащем на менее 50 мкг мышьяк, а 100 г. Навеску измельчают, переносят в колбу Кьельдаля, приливают 10-20 мл азотной кислоты, выдерживают в течении 12 с и 2 часа медленно нагревают на электроплитке, избегая бурной реакции.

После замедления выделения коричневых паров колбу охлаждают 20-30 мин, прибавляют 10 мл азотной кислоты и вновь нагревают на электроплитке до исчезновения бурых паров. Если жидкость окрашена в темный (коричневый) цвет, то операцию повторяют.

Затем в остывшую колбу приливают 1 мл хлорной кислоты и озоляют до полного обесцвечивания содержимого. При отсутствии хлорной кислоты ее можно заменить перекисью водорода. В остывшую колбу вносят 5 мл насыщенного раствора щавелевокислого аммония, нагревают до выделения белых паров серной кислоты и охлаждают.

I Стенки колбы обливают дистиллированной водой и вновь нагревают, Раствор в колбе должен быть бесцветным или соломенно-желтым.

Контрольную пробу готовят аналогично, но вместо навески приливают адекватное количество дистиллированной воды. Для отгонки и поглощения мышьяка собирают прибор, состоящий го реакционной (отгонной) колбы емкостью 150 мл (1), соединительной трубки (2) со шлифом 24/29, капилляром, доходящим до дна отгонной колбы на одном конце и каплеуловителем на другом. Последний соединяется с холодильником (3), колбой-приемником (4), колбой-ловушкой (5). Перед использованием прибор промывают азотной кислотой (1:1) и дистиллированной водой. В отгонную колбу количественно переносят минерализат из колбы Кьельдаля. В колбу- приемник, и в колбу-ловущку наливают соответственно 15 и 10 мл дистиллированной воды, добавляют 3-4 капли перекиси водорода и соединяют с прибором и между собой. Отгонную колбу присоединяют к холодильнику, через капельную воронку приливают 5 мл концентрированной соляной кислоты, 5 мл насыщенного раствора сульфата гидразина, закрывают кран воронки и вносят в не) 5 мл 30%-го раствора бромистого калия. Отгонную колбу ставят на электроплитку и после начала гашения вливаю бромистый калий, а воронку промывают дистиллированной водой. Отгоняют более 2/3 объема жидкости. Дистилляты в колбе-приемнике и колбе-ловушке объединяют, переносят в термостойкие стаканчики емкостью 100 мл, приливают 10 мл азотной кислоты с температурой 1300С. Затем добавляют 25 мл дистиллированной воды, нейтрализуют 5 Н раствором едкого натра по фенолфталеину, вносят 1-4 капли 0,1 Н йодистого калия, 5 мл 3 %-го раствора молибдата аммония и 2 мл свежеприготовленного 0,15%-го раствора сульфата гидразина. Стаканчик ставят на 30 минут в сушильный шкаф при 130°С или кипятят 3 минуты. После охлаждения раствор количественно переносят в мерную колбу на 50 мл. доводят до метки дистиллированной водой и измеряют оптическую плотность раствора по отношению к контролю на фотоколориметре при красном светофильтре (690нм) в 10 мм кювете. Количество мышьяка находят по калибровочному графику. Для построения калибровочной кривой готовят рабочий раствор, содержащий в 1 мл 2 мкг мышьяка, вносят его в термостойкие стаканчики (100 мл) в объеме 0,0; 12,5; 25,0; 37,5; и 50,0 мл, доводят дистиллированной водой до 50 мл и приливают по 10 мл концентрированной азотной кислоты. Затем поступают аналогично описанному ходу определения мышьяка в образцах тканей. Калибровочный график строят, откладывая на от абцис количество мышьяка (мкг), а на оси ординат – соответствующие значения оптической плотности раствора.

Содержание мышьяка в 100 г ткани или органа рассчитывают по формуле:

х= (а х 50 х100):б,

где х- количество мышьяка в 100 г ткани; а- масса мышьяка в пробе, найденная по калибровочному графику; б- навеска (г): 50 -объем раствора в мерной колбе после выпаривания дистиллята; 100 -расчет на 100 г органа или ткани.

За окончательный результат принимают среднее арифметическое значение результатов двух параллельных определений. Допустимое их расхождение при Р>0.01 не должно превышать 2,13-13,55% по отношению к среднему арифметическому.