Морфина и его метаболитов

использованы: материалы издания Всемирной организации здравоохранения «Basic analytical toxicology» Женева 1997 год., CLARKE’S ISOLATION AND IDENTIFICATION OF DRUGS London THE PHARMACEUTICAL PRESS 1986,

Морфин – Гексагидро – 12 – метил - 8,9с - иммуно-этанофенантро [4,5-bсd] фуран-3,5-диол моногидрат; C17H19NO3⋅H2O; относительная молекулярная масса 303. Морфин является основным алкалоидом опиума и сильным наркотическим анальгетиком. Диаморфин (героин, 3,6-О-диацетилморфин) в 2—3 раза сильнее морфина, его получают обработкой морфина (или опиума — в случае нелегального изготовления наркотических препаратов) уксусным ангидридом. Диаморфин быстро гидролизуется in vivo с образованием 6-ацетилморфина и затем морфина. Морфин, кроме того, является метаболитом кодеина. Приблизительно 5 % дозы морфина метаболизируется с образованием норморфина, но основной метаболический путь представляет собой конъюгацию с глюкуроновой кислотой. Основным продуктом является морфин-3-глюкуронид, но образуется также и морфин-6-глюкуронид. Свободный морфин в моче составляет примерно 10 % принятой дозы, тогда как на долю морфин-3-глюкуронида приходится 75 %. По оценкам, минимальная летальная доза морфина или диаморфина для взрослых, не принимающих эти соединения, составляет 100—200 мг.

Морфин может быть обнаружен с помощью тонкослойной хроматографии экстракта при рН 8,5—9. Поскольку значительная часть дозы диаморфина или морфина выводится в виде глюкуронидов, предварительный гидролиз мочи может повысить чувствительность метода.

Для доказательства употребления опиатов на химико-токсикологическое исследование направляют:

от живых лиц - кровь, мочу, слюну;

для установления факта употребления опиатов в качестве объектов исследования могут быть использованы слюна от живых лиц. При этом необходимо иметь в виду, что героин в слюне сохраняется дольше, чем в крови, и он может быть обнаружен в течение одного часа после курения и внутривенного ведения.

1.1.Изолирование наркотических веществ из мочи живых лиц

Если моча концентрированная (темного цвета с осадком), необходимо провести ее очистку однократной экстракцией диэтиловым эфиром в соотношении на 25 мл мочи 10 мл эфира при подкислении соляной кислотой до рН 2

К 25 мл мочи добавляют раствор аммиака до рН 8-9 и экстрагируют смесью хлороформа и изопропанола в соотношении 8:2 трехкратно. Соотношение фаз 1:1. Хлороформное извлечение фильтруют через безводный сульфат натрия. Объединенные извлечения упаривают до сухого остатка слабо нагретым феном или на воздухе и исследуют.

50 мл мочи в делительной воронке подщелачивают 25% раствором аммиака до рН 8-9 трехкратно по 10 мл этилацетатом при встряхивании в течение 10 минут. Этилацетатные извлечения объединяют и центрифугируют при 3000 об/мин 15 минут для разделения образующейся эмульсии. После центрифугирования верхний прозрачный слой отбирают шприцем, обезвоживают высушенным безводным сульфатом натрия. Элюент выпаривают в вытяжном шкафу, сухой остаток растворяют в минимальном количестве этилацетата и наносят на пластинку.

1.1.3. Добавить 2 мл концентрированной соляной кислоты в 10 мл мочи или к стандарту для гидролиза в пробирке.

2. Нагревать на кипящей водяной бане в течение 30 мин.

3. Оставить охладиться, декантировать в стеклянный стакан объемом 250 мл и медленно добавлять бикарбонат натрия до прекращения выделения пузырьков газа, при этом в стакане остается твердый бикарбонат натрия. Будьте осторожны: эта реакция может протекать очень бурно.

4. Декантировать гидролизат в чистую пробирку, добавить 10 мл смеси этилацетат:пропан-2-ол (9:1) и перемешивать вихревой мешалкой в течение 3 мин.

5. Центрифугировать в течение 5 мин, профильтровать верхнюю органическую фазу через фазоразделяющую фильтровальную бумагу в чистую пробирку и отбросить нижний водный слой.

6. Выпарить экстракт концентрировать под струей сжатого воздуха, или собрать в мерную колбу в зависимости от цели анализа.

1.2. Изолирование наркотических веществ из крови живых лиц

5мл сыворотки или плазмы, полученных путем центрифугирования крови при 3000 об/мин в течение 15 минут, осаждают белки 40% раствором трихлоруксусной кислоты и снова центрифугируют. Центрифугат подщелачивают 25% ратвором аммиака до рН 8-9, извлекают трехкратно этилацетатом по 10 мл. Этилацетатные извлечения объединяют и центрифугируют. Верхний прозрачный слой отбирают шприцем, обезвоживают высушенным безводным сульфатом натрия, испаряют и исследуют.

Качественный анализ

Реактивы

1. Концентрированная соляная кислота (относительная плотность 1,18).

2. Бикарбонат натрия (твердый).

3. Пластинки с силикагелем для тонкослойной хроматографии (10 х 20см, средний размер частиц 20 мкм).

4. Метанол:концентрированный гидроксид аммония (относительная плотность 0,88) (99:1,5) (МА).

5. Этилацетат:метанол:концентрированный гидроксид аммония (относительная плотность 0,88) (85:10:5) (ЭМА).

6. Реактив, содержащий йодоплатинат. Смешать 0,25 г хлорида платины и 5 г йодида калия в 100 мл очищенной воды.

Стандарты

1. Стандарты для гидролиза: кодеин, дигидрокодеин и морфин-3-глюкуронид (все по 1 мг/л) в контрольной моче.

2. Стандарты для тонкослойной хроматографии: кокаин, кодеин, дигидрокодеин, метадон и морфин (все по 1 г/л) в хлороформе.

Метод

Тонкослойная хроматография

1. Растворить экстракты в 50 мкл смеси этилацетат: пропан-2-ол (9:1) и нанести на три колонки двух пластинок равные порции экстрактов образца и стандарта и 10 мкл хроматографического стандарта.

2. Проявлять одну пластинку в МА, а другую — в ЭМА (расстояние от старта до фронта 10 см, насыщенные камеры).

3. Дать высохнуть, проследить за тем, чтобы запах аммиака полностью выветрился, и опрыскать обе пластинки реактивом, содержащим йодоплатинат.

Результаты

В табл. 1. приведены величины hRf и цветовые реакции лекарственных препаратов, содержащихся в стандартных смесях, и ряда других представляющих интерес соединений. Изложенная методика не позволяет получить информацию о присутствии диаморфина, поскольку это соединение, а также 3-О-ацетилморфин и 6-О-ацетилморфин, как и морфин-глюкурониды, гидролизуются с образованием морфина.

Необходимо провести анализ экстракта гидролизуемого стандарта и стандарта для тонкослойной хроматографии, так как соединения, экстрагированные из гидролизованной мочи, как правило, мигрируют в процессе тонкослойной хроматографии более медленно вследствие влияния одновременно экстрагируемых веществ, и это следует принять к сведению при интерпретации результатов анализа.

Таблица 1.

Тонкослойная хроматография морфина и близких к нему соединений:

величины hRf и цветовые реакции

Соединение	ЭМА	МА	Цвет
Метаболит метадона			Пурпурный
Кокаина			Фиолетовый
Метадон			Пурпурный (с белым кольцом)
Пентазоцин			Пятнистый синий
Циклизин			Пятнистый темно-синий
Метаболит декстропропок- сифена			Синий (на МА — полосы)
Никотин			Темно-коричневый
Котинин (из никотина)			Темно-зелённый
6-Ацетилморфина			Пятнистый синий
Кодеин			Синий
Дигидрокодеин			Темно-синий
Метаболит кодеина			Сине-фиолетовый
Метаболит дигидрокодеина			Темно-синий
Морфин			Сине-черный