Приготовление стандартного раствора глюкозы

1,6 г безводной глюкозы взвешивают с точностью до 0,0002 г и растворяют в мерной колбе вместимостью 1000 см³. Предварительно глюкозу выдерживают в эксикаторе над свежеприготовленным хлоридом кальция в течение 3 суток. После растворения навески раствор в колбе доводят до метки. Если раствор готовят на месяц, необходимо внести в колбу 150 г хлорида натрия и хранить в холодильнике.

Построение градуировочного графика

В 6 конических колб вместимостью 100 см³ вносят пипеткой по 25 см³ щелочного раствора гексацианоферрата (III) калия по 7,0; 7,5; 8,0; 8,5; 9,0; 9,5 см³ стандартного раствора глюкозы. Дистиллированной водой из бюретки доводят объем жидкости в каждой колбе до 41 см³. Содержимое колб доводят до кипения за 3 мин и кипятят в течение 1 мин, закрыв каждую часовым стеклом. Затем охлаждают и измеряют оптическую плотность на ФЭК со светофильтром, имеющим lэф = 440 нм (синий светофильтр). Раствором сравнения служит дистиллированная вода. Кювету подбирают такого размера, чтобы оптическая плотность была в пределах 0,3-0,6 для раствора, содержащего 8,5 см³ раствора глюкозы (10, 20 или 30 мм). Оптическую плотность определяют в каждом растворе не менее 3 раз и из полученных данных берут среднее арифметическое значение. Строят график зависимости величины оптической плотности от концентрации глюкоза в растворе. Полученный график используют для определения содержания общего сахара, восстанавливающих сахаров и сахарозы.

Определение восстанавливающих сахаров

В коническую колбу вместимостью 100-150 см³ вносят 10 см³ раствора пробы, 6 см³ дистиллированной воды и затем 25 см3 щелочного раствора гексацианоферрата калия. Колбу нагревают до кипения за 3 мин, кипятят 1 мин, охлаждают и измеряют оптическую плотность при l=440 нм. Раствор сравнения – дистиллированная вода. Кювету берут размером, аналогичным взятому для построения градуировочного графика. Если оптическая плотность раствора не попадает в интервал 0,3-0,6, необходимо взять меньшую пробы или поменять разведение, сохраняя постоянный объем жидкости в реакционной колбе, равным 41 см³. Результаты вычисляют, пользуясь градуировочным графиком и приведенной формулой.