2015-09-06
332
Способи культивування ізольованих протопластів відповідають тим, що використовують для вирощування клітин. Протопласти культивують у рідкому і агаровому середовищах (табл.6).
Одним із прийомів культивування ізольованих протопластів у рідкому середовищі є метод рідких крапель. У цьому разі суспензію протопластів у вигляді крапель поміщають на рідке середовище в чашках Петрі. Метод забезпечує хороший газообмін. Однак при культивуванні цим способом ізольовані протопласти агрегуються у центрі кожної краплини, накопичуючись вони утворюють значні кількості фенольних та інших токсичних сполук, що заважає нормальному культивуванню протопластів.
Другий спосіб культивування ізольованих протопластів - агарова культура або метод плейтінга. У цьому випадку певний об’єм суспензії протопластів у рідкому живильному середовищі наливають у чашки Петрі, додають рівний
Таблиця 6
Склад (мг/л) середовищ для культивування протопластів
| Компоненти середовища | Гамборга та Евелега | Мурасиге і Скуга | Нагате і Такебе | Шенка і Хільде-брандта |
| NH4NO3 | ||||
| KNO3 | ||||
| CaCl2×2H2O | ||||
| MgSO4×7H2O | ||||
| NaH2PO4 | ||||
| (NH4)2SO4 | ||||
| KH2PO4 | ||||
| FeSO4×7H2O | 27,25 | 27,85 | 27,8 | 27,85 |
| Na2EDTA .2H2O | 37,25 | 37,25 | 37,3 | 37,3 |
| H3BO3 | 6,2 | 6,2 | ||
| ZnSO4×7H2O | 8,6 | 8,6 | ||
| CuSO4×5H2O | 0,025 | 0,025 | 0,025 | 0,2 |
| CoCl2×6H2O | 0,025 | 0,025 | 0,03 | 0,1 |
| KI | 0,75 | 0,83 | 0,83 | |
| Na2MoO4×2H2O | 0,25 | 0,25 | 0,25 | 0,1 |
| MnSO4×H2O | 22,3 | 22,3 | ||
| Iнозит | ||||
| PP | ||||
| В1 | ||||
| В6 | 0,5 | |||
| Ca-пантотенат | ||||
| Кінетин | 0,1 | |||
| НОК | ||||
| 2,4-Д | ||||
| Сахароза | ||||
| Маніт | 0,7 M | |||
| pH | 5,5 | 5,5 | 5,8 | 5,6 |
об’єм того ж самого середовища, яке містить 1% агару. Температура не вища 450С. Чашки Петрі заклеюють парафілмом і культивують перевернутими при температурі близько 280С.
Протопласти фіксовані в одному положенні і фізично відокремлені один від одного. Основна перевага, цього способу культивування це можливість спостерігати для кожного конкретного протопласта всю послідовність розвитку – формування клітинної стінки, поділ клітин, ріст і розвиток рослини. Недолік полягає у можливому пошкодженні протопластів коли вони змішуються з агар-агаром.
Різновидністю агарової культури є сумісні культури. Цей спосіб використовується для ефективного культивування деяких протопластів. Протопласти, які відрізняються швидким ростом, змішують з протопластами, які важко культивувати. Вважають, що успішне культивування обумовлене речовинами, які виділяють протопласти, що швидко ростуть.
