Реакции осаждения белков

Цель: Изучить физико – химические свойства белков (молекулярный вес, растворимость, осаждение, денатурация, амфотерность).

Нарушение факторов, стабилизирующих структуру молекулы белка, приводит к осаждению белков. Осаждение может быть с денатурацией и без нее. Обратимое осаждение (высаливание) достигается добавлением к водным растворам белков нейтральных солей щелочных металлов (NH₄Cl, Na₂SO₄, KCl). Необратимое осаждение достигается ионами тяжелых металлов, минеральными и органическими кислотами, спиртом, эфиром, алкалоидами.

Реакции осаждения белков используются, в частности, в диагностических лабораториях для исследования биологических жидкостей. Так, моча здоровых животных содержит незначительное количество белка. При некоторых патологических состояниях в моче может появиться белок (альбуминурия). Она может быть истинной (почечной), когда белок примешиваются к моче после выхода ее из почек. Это наблюдается при заболеваниях мочеточников, почечных лоханок, мочевого пузыря. Истинная альбуминурия бывает патологической и физиологической. Последняя наблюдается при сильном мышечном напряжении, переохлаждении, у новорожденных или беременных животных.

Задание 1. Проба с сульфасалициловой кислотой

Ход работы: В одну пробирку наливают 1 мл мочи, в другую 1 мл белка и приливают 2-3 капли 20% сульфасалициловой кислоты. Образование мути свидетельствует о наличии белка.

Задание 2. Проба с кипячением

Лучший способ осаждения белков – кипячение в средах, имеющих значение рН, равное изоэлектрической точке белков. Внесение в раствор белка нейтральных солей облегчает и ускоряет осаждение при кипячении в результате возникновения и дегидратирования белковых частиц.

Ход работы: В 5 пробирок помещают по 5 мл раствора белка. В первой пробирке раствор нейтральный. Во второй создаем слабо – кислую реакцию. Для этого вливаем 1 мл раствора уксусной кислоты. В третью пробирку добавляем 3 мл уксусной кислоты для создания кислой реакции среды. В четвертую пробирку добавляем 5 мл уксусной кислоты и 2 мл насыщенного раствора NaCl. В пятую – добавим 2 мл раствора NaOH, создадим тем самым щелочную среду. Затем все пробирки нагреем до кипения. Нужно обратить внимание на образование осадка белка и сделать выводы.

Задание 3. Кольцевая проба Геллера

Ход работы: В пробирку внесем 1 мл концентрированной азотной кислоты, и наслоить по стенке около 1 мл мочи. При наличии белка на границе раздела жидкостей появиться муть (белковое кольцо), а при отсутствии белка – цветное прозрачное кольцо пигменты мочи.

Задание 4. Осаждение этанолом и ТХУ

Ход работы: В две пробирки вносят по 5 мл яичного белка. В одну добавляют 1 мл этанола и в другую 1 мл раствора ТХУ и наблюдают осаждение белка.