Цветные реакции на белки

Задание 1. Обнаружение в белках пептидных связей (биуретовая реакция).

Белки (полипептиды) в щелочном растворе в присутствии сульфата меди (II) образуют комплексное соединение меди, окрашенное в сине – фиолетовый цвет, интенсивность которого зависит от количества пептидных связей в молекуле белка.

Название «биуретовая реакция» происходит от производного мочевины – биурета, который дает эту реакцию в соответствующих условиях.

Продукты неполного гидролиза белка (пептиды) дают красное или розовое окрашивание.

Ход работы: К 1мл раствора яичного белка добавляют 2 мл раствора гидроксида натрия, 1-2 капли раствора сульфата меди, перемешивают. Содержимое пробирки окрашивается в красно – фиолетовый цвет.

Задание 2. Выделение казеина из молока.

Казеин (фосфопротеид) содержится в молоке в виде растворимой кальциевой соли, которая при подкислении распадается, и казеин выпадает в осадок. Избыток кислоты мешает осаждению, так как при рН ниже 4,7 (изоэлектрическая точка казеина) молекулы белка перезаряжаются и казеин вновь переходит в раствор.

Ход работы: К 2 мл молока добавить равный объем дистиллированной воды и 2 капли 10%-ной уксусной кислоты. Казеин выпадает в виде хлопьев, которые можно собрать на фильтре и промыть водой.

Цветные реакции с белками на обнаружение карбоновых аминокислот

Для обнаружения остатков карбоновых аминокислот используют характерные для этих аминокислот цветные реакции.

Задание 1. Нингидриновая реакция (на L- аминокислоты).

При нагревании аминокислоты окисляются нингидрином и подвергаются окислительному дезаминированию с образованием аммиака и декарбоксилированию с образованием альдегида и СО₂. Нингидрин восстанавливается и конденсируется с аммиаком, окисленным нингидрином. Образуется соединение, окрашенное в сине – фиолетовый цвет.

Ход работы: К 1 мл яичного белка добавляют 3 капли раствора нингидрина. Смесь перемешивают и ставят на водяную баню при 70ºС на 5 минут.

Задание 2. Реакция Сакагучи на аргинин.

Аргинин в присутствии α – нафтола окисляется гипобромитом, теряя при этом одну аминогруппу. Окисленный аргинин, соединяясь с α – нафтолом, образует вещество красного цвета.

Ход работы: В пробирку вносят 0,5мл раствора белка, 0,5мл раствора гидроксида натрия, 3 капли раствора α – нафтола и после перемешивания 2-3 капли раствора гипобромида натрия.

Задание 3. Реакция Фоля на цистин и цестеин.

При кипячении цестеина и цистина в щелочной среде от них легко отщепляется сера в виде сероводорода, который в щелочной среде образует сульфат натрия, обнаруживаемый с помощью ионов тяжелых металлов.

1) а) (СН₃СОО)2Pb+2NaOH→2CH₃COONa+↓Pb(OH)₂+NaOH;

б) Pb(OH)₂+2NaOH→NaPbO₂+2H₂O+избытокNaOH;

 

 

CH₂─SH CH₂OH

│ │

2) CH──NH₂+2NaOH→CH─NH₂+Na₂S+H₂O;

│ │

COOH COOH

Цистеин Серин

 

 

3) Na₂S+Na₂PbO₂+2H₂O→PbS↓+4NaOH.

Черный

осадок

Ход работы: К 3 мл раствора яичного белка добавляют 3 мл реактива Фоля и перемешивают, кипятят на водяной бане, в течении 2 минут. После остывания наблюдают образование бурого или черного осадка нерастворимого сульфата свинца.

Цветные реакции с белками на обнаружение циклических аминокислот.