Осадження концентрованими кислотами.
Принцип методу. При дії на білок концентрованих мінеральних і органічних кислот відбувається денатурація білка внаслідок дегідратації та утворення комплексних сполук. В більшості мінеральних кислот осад денатурованого білка може розчинитися при надлишку кислоти, хоча білок не повертається до нативного стану. Тільки в присутності азотної, сульфосаліцилової та трихлороцтової кислот утворюється стійкий осад і це застосовується в медичній практиці для визначення вмісту білка в біологічних рідинах.
Хід роботи. В чотири пробірки наливають по 1 мл кислот: в першу - концентрованої азотної кислоти; в другу - концентрованої сірчаної кислоти; третю - 10% розчину трихлороцтової кислоти, четверту - 2% розчину сульфосаліцилової кислоти. Обережно по стінці в кожну пробірку наливають рівний об’єм розчину білка. При додаванні надлишку азотної, трихлороцтової і сульфосаліцилової кислот осад не розчиняється, а при додаванні надлишку сірчаної кислоти осад розчиняється.
|
|
Якісне визначення глюкози (реакції Тромера, Фелінга).
Реакція Тромера.
Принцип методу. Реакція грунтується на відновленні окисної міді у закисну.
Хід роботи. В пробірку наливають 1-2 мл сечі і доливають рівний об'єм їдкого натру. По краплях додають розчин мідного купоросу до появи незникаючої каламуті гідроокису міді. Обережно нагрівають верхню частину вмісту пробірки. Поява жовтого забарвлення гідрату міді, яке переходить в червоно-цеглянисте 9 вказує на позитивну реакцію Тромера.
Реакція Фелінга.
Принцип методу. З реактивом Фелінга такий самий,як і при реакції Тромера. Перевагою реакції Фелінга є те, що мідь при надлишку реактиву не утворює окису міді. Реакція зупиняється на стадії утворення закису міді червоного кольрору, що дозволяє чітко визначити кінець реакції.
Хід роботи. До 1-2 мл сечі додають рівний об'єм реактива Фелінга та нагрівають. У випадку наявності глюкози в сечі спостерігають утворення осаду червоно-цеглянистого кольору закису міді.
Кількісне визначення глюкози (за методом Альтгаузена).
Принцип методу. Метод базується на тому, що сеча, яка містить цукор при кип’ятінні з лугом набуває різних відтінків коричневого кольору (від жовтого до темно-бурого). Продуктами реакції є молочна кислота та гумінові речовини.
Хід роботи. 4-5 мл сечі змішують в пробірці з 1мл 10% їдкого натрію або калію; кип’ятять 1 хвилину і залишають на 10 хвилин в штативі. При наявності цукру в сечі в пробірці утворюється один з відтінків стандартної шкали Альтгаузена.
ШКАЛА АЛЬТГАУЗЕНА
Готують вихідний стандартний розчин. Для цього до сечі, яка не містить цукор, додають глюкозу з такого розрахунку, щоб її концентрація дорівнювала 4%. З цього розчину при розведенні сечі, яка не містить цукор, готують розчини різної концентрації за схемою:
|
|
№ Вихідний станд. Сеча, яка не містить Одержана концентрація
пробірки розчин (в мл) цукор (в мл) цукру в сечі, %
1 0,5 3,5 0,5
2 1,0 3,0 1,0
3 1,5 2,5 1,5
4 2,0 2,0 2,0
5 2,5 1,5 2,5
6 3,0 1,0 3,0
7 3,5 0,5 3,5
До всіх пробірок додають по 1 мл 10% лугу та кип’ятять.