2018-01-21
2541
Чума плотоядных (болезнь Карре) – остро протекающая болезнь собак, волков, лисиц, шакалов, норок, соболей, енотов и других плотоядных, характеризующаяся лихорадкой, острым катаральным воспалением слизистых оболочек, пневмониями, кожной экзантемой и поражениями нервной системы.
Болезнь проявляется несколькими клиническими признаками, поэтому выделяют ее несколько форм. При легочной форме отмечают развитие пневмоний. Кишечная форма характеризуется рвотой, запорами или поносами с примесью крови. Кожная форма сопровождается появлением на бесшерстных участках пустулезной сыпи, наполненной зеленоватым содержимым. Нервная форма проявляется сильным возбуждением животного, судорогами и параличами конечностей. При всех формах болезни отмечают поражение глаз в виде конъюнктивита, светобоязни, опухания век и кератита.
Возбудителем чумы плотоядных является вирус из семейства Paramyxoviridae, подсемейства Paramyxovirinae, рода Morbillivirus. Кроме указанного возбудителя данный род также включает возбудителей кори человека, чумы крупного рогатого скота, между которыми и вирусом чумы плотоядных установлено антигенное, а в случае с вирусом кори человека – и иммунобиологическое родство. Возбудитель вызывает заболевание у млекопитающих главным образом семейства волчьих – чума кошек не родственна чуме плотоядных. Человек и приматы к вирусу не восприимчивы.
В антигенном отношении возбудитель однороден, однако в одних случаях специфические антитела нейтрализуют вирус в высоких концентрациях, а в других способны нейтрализовать только низкие концентрации антигена. В этой связи первые штаммы условно называются классическими, а вторые – вариантными, хотя иммунобиологических различий между ними нет.
При попадании в организм вирус проходит первичную репликацию в лейкоцитах миндалин, лимфоузлов и крови. Эта стадия на уровне организма характеризуется инкубационным и продромальным периодами и длится обычно в течение первых 6 дней. Выделение вируса из патматериала на этой стадии крайне затруднено. С 6-9-го дня начинается репликация вируса в эпителиальных клетках различных органов и тканей, а также глиальных клетках центральной нервной системы. Обычно в это время проявляются симптомы болезни – диарея, конъюнктивит и конвульсии.
Лабораторная диагностика. Многообразие симптомов болезни обычно затрудняет своевременную постановку диагноза, поэтому решающее значение имеет лабораторная диагностика. Изоляция вируса из патматериала затруднена, поэтому часто диагноз ставят на основании результатов первичного обнаружения вируса в патматериале.
Отбор патматериала. При жизни животного отбирают пробы крови в первые 6 дней болезни, когда вирус реплицируется в лейкоцитах, а также мазки из носа и конъюнктивы для гистологического и серологического исследований. От трупов берут кусочки легких, трахеи, селезенки, почек, головного мозга и обязательно мочевой пузырь. При этом отбирают материал как для вирусологического, так и для гистологического исследования. Во втором случае пробы консервируют в 10%-ном нейтральном формалине.
Подготовка материала заключается в приготовлении мазков, препаратов-отпечатков и приготовлении суспензии для выделения вируса.
Мазки готовят из слизистой оболочки мочевого пузыря. Для этого на предметном стекле в капле физиологического раствора равномерно распределяют соскоб со слизистой и с помощью шлифовального стекла делают мазок. Препараты-отпечатки готовят из печени, почек, желчного пузыря, желудка, легких и мозга. В дальнейшем препараты из материала, присланного для вирусологического исследования, исследуют в РИФ, а для гистологического – на обнаружение специфических телец-включений.
Первичное обнаружение вируса при чуме плотоядных имеет большое значение, так как успешное выделение вируса из патматериала не всегда удается. Вирус обнаруживают в патматериале по результатам РИФ и гистологического исследования. В РИФ можно исследовать препараты, полученные как после смерти животного, так и при жизни (из конъюнктивы и носовых ходов). Положительный результат характеризуется специфическим свечением пораженных клеток.
Гистологический метод менее чувствителен, чем серологический для первичного обнаружения вируса в патматериале, поэтому рекомендуют их сочетанное использование при постановке диагноза. С этой целью приготовленные мазки, отпечатки или гистосрезы окрашивают смесью красок метиленового синего и фуксина в течение 1 мин и исследуют под микроскопом. Ядра эпителиальных клеток окрашиваются в сине-фиолетовый цвет, цитоплазма – в светло-сиреневый цвет, а вирусные тельца – в ярко-красный или малиновый. При этом включения располагаются в цитоплазме клеток или внутри их; округлой, овальной или полиморфной формы, имеют четкие края, количество их колеблется от единичных до десяти и более в одной клетке.
Выделение вируса проводят на развивающихся куриных эмбрионах или культурах клеток. В первых пассажах вирус вызывает лишь слабое помутнение ХАО и гибель эмбрионов в 5-10% случаев. О предполагаемом присутствии вируса судят при постановке РГА с эритроцитами цыпленка.
Из культур клеток для выделения вируса чаще используют клетки почек хорька и альвеолярных макрофагов. ЦПД характеризуется формированием круглых многоядерных гигантских клеток, на месте которых в последующем образуется синцитий неправильной формы. Возможно также проводить культивирование уже зараженных клеток почек, полученных от больных исследуемых собак.
Идентификацию изолированного вируса проводят с помощью серологических реакций, использование которых зависит от способа изоляции возбудителя. В случае выделения вируса на РКЭ используют РТГА с 1%-ной взвесью куриных эритроцитов, при этом гемагглютинирующий титр может достигать высоких значений (1:2560 и выше).
В случае выделения культурального вируса используют РН на культурах клеток. Для этого к зараженной культуре добавляют питательную среду 5% специфической сыворотки сразу же после контакта вируса с клеточным монослоем. По подавлению ЦПД вируса судят о специфичности поражения клеточного монослоя.
Парвовирусный энтерит плотоядных - контагиозная вирусная болезнь щенков моложе 5-месячного возраста, проявляющаяся рвотой, геморрагическим гастроэнтеритом, миокардитом, лейкопенией, дегидратацией и гибелью.
Выделяют три формы болезни: сердечная (у собак 3-8-недельного возраста), кишечная (с 8-недельного до 9-месячного возраста), а также комбинированная (6-16-недельного возраста). Развитие того или иного синдрома обусловлено необходимостью размножения возбудителя только в активно делящихся клетках, поражение органов зависит от возраста животного. Возбудителем парвовирусной инфекции собак является вирус из семейства Parvoviridae, рода Parvovirus. Данный род также включает возбудителей панлейкопении кошек, алеутской болезни норок, энтерита норок, парвовирусы свиней, крупного рогатого скота и других животных.
Общим свойством всех вирусов семейства Parvoviridae является наличие односпиральной линейной молекулы ДНК. Данное семейство включает автономные (недефектные) вирусы, требующие для своей репликации только чувствительную клетку, а также дефектные вирусы, которые требуют присутствия вируса-помощника, чаще аденовируса или герпесвируса. К автономным вирусам относят все вирусы родов Parvovirus и Erythrovirus. Все дефектные вирусы объединены в род Dependovirus.
Вирионы парвовирусной инфекции собак представляют собой безоболочечные частицы с кубической симметрией, капсид которых состоит из 32 капсомеров. Парвовирусы являются самыми мелкими вирусами животных и имеют размер 18-26 нм. Вирион представляет собой односпиральную линейную молекулу ДНК, окруженную белковым капсидом. У всех штаммов имеются три типа полипептидов, обозначаемых как VP67, VP70, VP85. Присутствие липидов, углеводов и ферментов в составе вирионов не обнаружено. Простое химическое строение придает вирусу большую устойчивость во внешней среде как к температурным фактору – устойчив в течение 1 часа при 60ºС, так и химическому воздействию. Данное свойство обусловливает постоянное присутствие вирусов во внешней среде и контаминацию биологических препаратов.
В антигеном отношении парвовирусы собак родственны парвовирусам энтерита норок и панлейкопении кошек, поэтому они объединены в одну серологическую подгруппу парвовирусов.
Парвовирусы способны размножаться только в высоко активных, интенсивно пролиферирующих клетках, поэтому культивирование возбудителя в первично-трипсинизированных клетках неэффективно. С этой целью используют перевиваемые линии, наиболее высокочувствительными из которых является культура клеток А-72, получаемая из подкожной опухоли собак. Однако реплицирующийся вирус развитие ЦПД в культуре клеток не вызывает, а его присутствие обнаруживается только по результатам РИФ.
Вирус обладает гемагглютинирующей активностью к эритроцитам многих видов животных, однако наиболее часто с этой целью используют эритроциты свиней. Все парвовирусы собак по гемагглютинирующей активности могут быть разделены на две подгруппы: штаммы первой подгруппы агглютинируют эритроциты в широких температурных диапазонах – от 4ºС до 37ºС, а второй подгруппы – только при 4ºС. В этой связи постановку реакции с парвовирусами собак рекомендуется проводить при низкой температуре – 2-4ºС.
В организме зараженного животного вирус репродуцируется в клетках эпителия кишечника, лимфоидной ткани миндалин, лимфоузлов, селезенки, пейеровых бляшек и миокарда.
Отбор и подготовка материала. В лабораторию направляют от больных животных пробы фекалий, взятые в первые дни болезни, и сыворотку крови для серологической диагностики. От погибших животных отбирают сердечную мышцу и тонкий кишечник. Материал отправляют в термосе со льдом.
Лабораторная диагностика парвовирусной инфекции собак может проводиться по следующим направлениям:
- обнаружение гемагглютинирующего вируса в патматериале с последующей идентификацией вируса в РТГА или ИФА;
- обнаружение специфических антител в сыворотке крови собак.
Обнаружение вируса в патматериале постановки РГА. С этой целью из проб фекалий, отобранных в первые четыре дня болезни, готовят на забуференном физиологическом растворе 20%-ную суспензию, после чего ее центрифугируют при 3-5 тыс. об/мин (при возможности 8-10 тыс. об/мин). Образовавшуюся надосадочную жидкость используют в РГА. Реакцию гемагглютинации проводят при 2-4ºС с 0,5-1%-ной взвесью эритроцитов свиней. Учет реакции проводят через 1-1,5 часа. При наличии гемагглютинирующего вируса в материале проводят его идентификацию.
Идентификацию вируса в патматериале проводят при помощи РТГА или ИФА. Постановку РТГА осуществляют общепринятыми методом микро- и макровариантов с 4-8 ГАЕ вируса при 4ºС. Используемые в реакции иммунные сыворотки инактивируют 1 час при 56ºС, после чего их обрабатывают эритроцитами свиней и раствором каолина. При отсутствии гемагглютинации с разведениями вируса 1:8 и 1:16 результат считают положительным
Для постановки ИФА используют кошачьи антитела к вирусу панлейкопении кошек.
Серодиагностику парвовирусной инфекции собак осуществляют в РТГА, где в качестве антигена используют штамм вируса SP-80, получаемый в культуре легочных клеток кошек. В реакции используют эритроциты свиней, фиксированные 3%-ным раствором формальдегида. Исследуемую сыворотку инактивируют прогреванием при 56ºС в течение 30 минут и адсорбируют свиными эритроцитами с целью удаления неспецифических агглютининов. Сыворотки считают положительными при наличии специфических антител в разведении 1:160 и выше.
Алеутская болезнь норок (плазмоцитоз норок) – контагиозная, медленно развивающаяся инфекционная болезнь, характеризующаяся распространенной плазмоклеточной пролиферацией (плазмоцитозом), гипергаммаглобулинемией, явлениями геморрагического диатеза, анемией и прогрессирующим истощением зверей.
К болезни восприимчивы норки всех пород, независимо от пола и возраста, однако животные определенных пород (алеутские, сапфировые, голубые) генетически предрасположены к более тяжелому проявлению болезни. Как было установлено, они являются гомозиготными носителями рецессивного гена аа. Болезнь протекает остро, подостро, хронически (чаще) и латентно. Различают бессимптомное развитие болезни (непрогрессирующая форма), которое развивается у норок без генетической предрасположенности, а также зараженных вертикальным путем от инфицированных матерей. Эта форма отличается невысокой летальностью и непостоянным наличием клинических и патологоанатомических изменений. Обычно через один год после заражения непрогрессирующая форма переходит в прогрессирующую.
Прогрессирующая стадия болезни характеризуется специфическим симптомокомплексом болезни. Первоначальными признаками болезни является снижение привеса, исхудание, затем отмечают кровотечения из ротовой полости, развитие анемии, менингита, парезы и параличи. Смертность при этой форме достигает 70-80%. У животных всегда отмечают изменения в почках, печени, лимфоузлах, селезенке, а также геморрагический диатез во внутренних органах. Возбудителем алеутской болезни норок является вирус из семейства Parvoviridae, рода Parvovirus. Возбудитель относится к группе автономных дефектных парвовирусов и содержит однонитевую молекулу ДНК. Как и все парвовирусы, вирус алеутской болезни норок является чрезвычайно устойчивым во внешней среде как вне клеток патматериала, так и в нем.
Внутри организма вирус находится в связанном с клеткой состоянии, а также вне клетки. Внутри клетки-мишени, в качестве которой могут быть клетки периферической крови, селезенки, тимуса, лимфоузлов и костного мозга, вирус связан с клеточными ядрами и различными органеллами, в частности рибосомами. Установлена способность к длительной персистенции внутри организма вследствие интеграции генома вируса с геномом клетки хозяина. Обычно такое состояние соответствует непрогрессирующей бессимптомной форме болезни, которая недоступна для клинической, биохимической (в ЙАТ) и иногда серологической (в РИЭОФ) диагностике. В последующем вирус стимулирует систему лимфоидных клеток к интенсивной пролиферации, в результате чего лимфоциты и плазматические клетки инфильтрируют многие органы и синтезируют повышенное количество иммуноглобулина сначала М, а затем G класса. Специфические антитела связываются с вирусом и присоединяют фракцию комплемента (С3), в результате чего образуется комплекс антиген-антитело-комплемент. Однако в образованных комплексах вирус сохраняет свою инфекционность и после поглощения комплекса макрофагами высвобождается и проходит дальнейшую репликацию. Кроме того, нефагоцитированные комплексы, присутствующие в крови в больших количествах, оседают в сосудах кровеносной системы, печени, почечных канальцах, обусловливая развитие характерного симптомокомплекса. Данный этап в патогенезе соответствует прогрессирующей стадии болезни, длительность которого различна. Однако в любом случае характер течения обычно хронический с появлением клинических признаков незадолго до смерти.
В составе вириона обнаружено несколько белков, некоторые из которых являются антигенами, но в патогенезе болезни также определенную роль играют антитела к ДНК вируса. Гемагглютинирующие и гемадсорбирующие свойства у вируса не установлены. Антигенной вариабельности и родства с другими вирусами не обнаружено. Хотя аналогичное заболевание регистрируется также у хорьков, штаммы вируса алеутской болезни норок и хорьков биологически различны.
Лабораторная диагностика. Диагноз на алеутскую болезнь норок ставят комплексно с учетом эпизоотологических, клинических и лабораторных данных. Лабораторная диагностика основана на обнаружении характерных патоморфологических изменений во внутренних органах павших животных, а также серологического исследования при жизни животного. Присутствие вируса в зараженном организме в комплексе с антителами не дает возможности культивировать, индицировать и идентифицировать вирус, поэтому лабораторная диагностика основана на обнаружении специфических антител в сыворотке крови больных животных, либо на выявлении повышенного количества гамма-глобулинов (косвенный неспецифический метод диагностики).
Отбор патматериала. Для серологического исследования в лабораторию направляют сыворотки крови от норок, для патоморфологического исследования – кусочки внутренних органов. Патматериал направляют в термосе со льдом.
Диагноз на алеутскую болезнь норок устанавливают на основании:
- обнаружения характерных гистологических изменений во внутренних органах (посмертная диагностика);
- выявления повышенного количества гамма-глобулинов и специфических антител в сыворотке крови больных норок (серодиагностика).
Гистологическое исследование основано на обнаружении диффузного плазмоцитоза во внутренних органах. При этом обнаруживают обширные клеточные пролифераты, состоящие из плазматических клеток, по ходу кровеносных сосудов, вокруг канальцев и клубочков почек; по ходу внутридольковых капилляров печени; красной пульпы селезенки; синусах лимфатических узлов.
Серологическая диагностика включает специфические реакции для обнаружения специфических антител в сыворотке крови, а также неспецифические методы для выявления повышенного содержания гамма-глобулинов в сыворотке крови.
Наиболее широко распространенным из неспецифических методов является йодагглютинационный тест (ЙАТ), основанный на свойстве йода осаждать гамма-глобулины при повышенном их количестве в сыворотке крови. Недостатком метода является невысокая чувствительность (40-60% инфицированных животных), а также отсутствие возможности выявлять зараженных норок в бессимптомный период.
Для постановки теста на обезжиренное стекло наносят одну каплю сыворотки крови и добавляют равное количество йодного реактива. Реакцию учитывают через 2 минуты. Положительный результат характеризуется образованием темно-коричневых хлопьев различной интенсивности. Йодный реактив готовят за сутки до исследования по следующей прописи: йода кристаллического 2 г, калия йодистого 4 г, дистиллированной воды 30 мл.
Тимоловая проба также является неспецифическим тестом, основанным на выявлении нарушения физико-химического состояния коллоидных растворов вследствие поражения печени. В тимоловом буфере белки выпадают в осадок и вызывают помутнение раствора. Результаты теста выражают в единицах экстинкции, умноженных на сто. У здоровых норок пробы колеблются от 0 до 4 ед., показатели 4,1-7 ед. считаются сомнительными, величина выше 7 ед. свидетельствует о болезни у исследуемого животного.
Изменение белкового состава крови при болезни можно также обнаружить методом электрофореза сывороточных белков. Установлено, что при алеутской болезни норок уровень гамма-глобулина превышает 14,9%. Недостатками неспецифических тестов диагностики алеутской болезни норок является невозможность диагностирования бессимптомной стадии болезни, а также получение положительных результатов в случае других неинфекционных поражений печени, желчного пузыря и почек.
К специфическим серологическим реакциям относят реакцию иммуноэлектроосмофореза (РИЭОФ), где в качестве антигена используют фреоновые экстракты внутренних органов экспериментально зараженных норок, а в качестве антитела – исследуемую сыворотку больных животных. РИЭОФ является основной для прижизненной диагностики алеутской болезни норок и широко используется в зверохозяйствах, где ежегодно в мае-июне исследуют всех самок без приплода, а также всех вновь поступающих в благополучные хозяйства норок.
Также для выявления антител разрабатывается ELISA- метод, который позволяет диагностировать зараженных животных в бессимптомную непрогрессирующую стадию.
