Построение градуировочного графика. птрпт

В три мерные пробирки на 5 мл добавляют по 0,1 мл (100 мкг) стандартного раствора анализируемого вещества (1 мг/мл) и по 3 мл 2 н раствора хлористоводородной кислоты. Гидролиз проводят на глицериновой бане в колбе с обратным холодильником при 125-130оС в течение 30 минут или на кипящей водяной бане в течение 1 часа. По окончании гидролиза холодильники промывают 1 мл 2 н. раствора хлористоводородной кислоты. После охлаждения объем гидролизата доводят 2 н раствором хлористоводородной кислоты до 5 мл. апап Далее для каждого гидролизата поступают следующим образом: в мерные пробирки переносят по 0,1, 0,25, 0,5, 1,0 мл стандартного раствора (2, 5, 10, 20 мкг вещества), доводят объем до 3 мл 2 н раствором хлористоводородной кислоты, проводят реакцию Браттона-Маршалла: добавляют 1 мл 0,1% раствора натрия азотистокислого, а через 5 минут – 0,5 мл 1% раствора аммония сульфамата. Полученный раствор встряхивают до полного удаления пузырьков газа, после чего добавляют 1 мл 0,1% раствора N-a–нафтилэтилендиаминдихлорида. Оптическую плотность измеряют через 15 минут на фотоэлектроколориметре в кюветах с толщиной слоя 10 мм, светофильтр зеленый, раствор сравнения – смесь реактивов для реакции Браттона-Маршалла (двойной объем).

Полученные данные используют для построения градуировочного графика зависимости оптической плотности от концентрации вещества.

Для количественного определения бензофенона, выделенного из биологического материала, 2,5 мл исследуемого раствора выпаривают досуха, сухой остаток растворяют в 5 мл 2 н раствора хлористоводородной кислоты, проводят реакцию Браттона-Маршалла и фотометрируют. Концентрацию анализируемых веществ определяют по градуировочному графику.

По значениям оптической плотности находят содержание вещества в пробе (Сх).

Для количественного определения производных 1,4-бензодиазепина можно использовать методы спектрометрии в УФ-области спектра (по собственному поглощению) и в видимой области спектра (по реакции образования азокрасителя).

 

 

47.Опиаты: морфин, кодеин, героин; вещества, сопутствующие алкалоидам опия. Характеристика. Особенности анализа, методы количественного определения.

Характеристика. Опиаты – природные и синтетические в-ва, получаемые из мака. Морфин – производ. фенантрена, относится к группе изохинолиновых алкалоидов. Морфина гидрохлорид – бел. игольчатые кристаллы или бел. крист. порошок. Медленно растворим в воде, трудно растворим в спирте. Несовместим со щелочами. Кодеин – 3-этилморфин, используется как противокашлевое ср-во центрального действия. Кодеина фосфат – б/ц кристаллы или бел. крист. порошок б/з, горького вкуса. Плохо растворим в диэтиловом эфире, лучше всего растворяется в хлороформе. Практически не растворяется в р-рах щелочей, кроме аммиака. Героин – бел. крист. порошок, горького вкуса, растворим в воде. Особенности анализа. Изолирование. 20 мл мочи подкисляют HCl до рН 2, гидролизуют на вод. бане 20 мин. Гидролизат охлаждают + 10% р-р аммиака до рН 9,0-9,5. Экстрагируют 2 раза в теч. 5 мин. двойным количеством смеси хлороформ – н-бутанол (9:1). Отделяют органич. слой, объединяют оба извлечения для дальнейшего исследования. Фильтруют через бум. фильтр с безводным сульфатом натрия и выпаривают в фарфор. чашке. Хроматографическая очистка и обнаружение. Система для хроматографирования: этилацетат-этанол (метанол) – аммиак (17:2:1). В качестве метчиков наносят р-р морфина, кодеина, наркотина, папаверина. Реагенты для проявления: 1) р. Марки: морфин – красно-фиолет. окраш.; кодеин – фиолетовое; наркотин – фиолетовое; папаверин – фиолетовое; омнопон – красно-фиолет.; героин – красно-фиолет. 2) р. Фреде: морфин – фиолетовое; кодеин – фиолет.-зел.; наркотин – сине-зел.; папаверин – сине-зел.; омнопон – фиолетовое; героин – фиолетовое.

 

48.Фенилалкиламины: амфетамин, метамфетамин, эфедрин, эфедрон. Характеристика. Особенности анализа, методы количественного определения.

Эфедрин, эфедрон Предварительное исследование. К 1 мл мочи добавляют кристаллический сульфат натрия до насыщения и затем по 0,5 мл сероуглерода в бензоле и аммиакат меди. Полученную смесь встряхивают в течение 30 мин. В этих условиях эфедрин и эфедрон образуют комплексное соединение с медью, содержащееся в верхнем органическом слое. Органическую фазу отбирают, а водную промывают 1 мл бензола. Объединенные органические экстракты 42 упаривают в токе холодного воздуха до объема 50-100 мкл. Упаренный экстракт количественно наносят полосой 3 см на линию старта пластинки “Cилуфол-УФ-354”. В качестве метчиков используют комплексы эфедрона и эфедрина с медью в концентрации 1 мг/ мл, приготовленные из чистых субстанций. Хроматографирование проводят в системе хлороформ – ацетон (48:2) – для эфедрина и в системе циклогексан-ацетон-метанол (40:10:2) –для эфедрона. Rf (эфедрина) –0,26; Rf (эфедрона)-0,27. Длина пробега растворителя 10 и 15 см соответственно. Пластинку просушивают и просматривают в УФ-свете. Желто- коричневое окрашивание и совпадение величин Rf с метчиками служит положительной реакцией и основанием для проведения дополнительного исследования. При отрицательном результате на эфедрин и эфедрон дальнейшее исследование не проводится.

Изолирование. 10 мл биологической пробы (мочи) доводят до рН 10 раствором карбоната натрия и трижды экстрагируют хлороформом по 10 мл. Объединенные хлороформные извлечения фильтруют через фильтр, смоченный хлороформом, и органический растворитель удаляют в выпарительной чашке досуха. Хроматографическая очистка и обнаружение. Остаток растворяют в 0,5 мл хлороформа и наносят на пластинку “Силуфол”, в качестве метчиков используют эфедрин, эфедрон и фенамин в виде оснований. Хроматографирование проводят в системе бензол – этанол – диэтиламин (9:1: 1). Длина пробега 10 см. После хроматографирования пластинку сушат в потоке теплого воздуха и опрыскивают свежеприготовленным раствором нингидрина в ацетоне. Затем пластинку нагревают в сушильном шкафу при 80- 1000С или в токе теплого воздуха. При наличии в пробе исследуемых веществ образуются темно-фиолетовые пятна с соответствующими значениями метчиков (эфедрин, эфедрон). Микрокристаллоскопические реакции. Эфедрин гидрохлорид 1. Реакция с иодвисмутатом калия. При взаимодействии капель растворов эфедрина гидрохлорида и иодвисмутата калия через 10 минут наблюдается выпадение кристаллического осадка, состоящего из кристаллов двух видов: темно-красных игл и тонких оранжевых пластинок. Предел обнаружения: 1 мкг эфедрина. 2. Реакция с солью Рейнеке. При взаимодействии капель раствора эфедрина гидрохлорида и 1%-ного свежеприготовленного раствора соли Рейнеке выпадает кристаллический осадок, состоящий из тонких пластинок прямоугольной формы.

49.Каннабиноиды: каннабидиол, каннабинол и другие. Характеристика. Особенности анализа, методы количественного определения.

Каннабиноиды

Основными компонентами, определяемыми в биожидкостях, являются: Δ 9 -тетрагидроканнабинол, Δ 8 -тетрагидроканнабинол, каннабинол, каннабидиол. Отбор пробы осуществляется протиранием рук подозреваемого в курении гашиша ватным или марлевым тампоном, смоченным этиловым спиртом. Спирт из образцов испаряют при комнатной температуре, а тампоны упаковывают в полиэтиленовые пакеты и направляют на исследование в лабораторию.

Изолирование. Каннабиноиды экстрагируют из материала тампона два раза диэтиловым эфиром порциями по 10 мл в течение 1 мин. Экстракт упаривают до конечного объема 0,1-0,3 мл и используют как для предварительного определения каннабиноидов характерными цветными реакциями, так и для качественного определения их методом тонкослойной хроматографии. Для предварительного исследования отбирают 5 мкл от аликвоты упаренного до малого объема экстраткта, наносят пробу на фильтровальную бумагу, высушивают и затем опрыскивают 0,5%-ным раствором прочного синего Б в 10%-ном водном растворе карбоната натрия. Отсутствие оранжевого окрашивания пятна служит основанием для заключения, что в пробе не обнаружены каннабиноиды. При появлении оранжевого окрашивания вторую аликвоту экстракта наносят на пластинку “Силуфол”. Хроматографическая очистка и обнаружение. Хроматографирование осуществляется в системе петролейный эфир-диэтиловый эфир (4:1) двукратно. Выявление пятен осуществляется опрыскиванием хроматограммы 0,5%-ным раствором прочного синего Б в 10%-ном растворе карбоната натрия. При этом в основном выявляется каннабинол (Rf = 0,76) и тетрагидроканнабинол (Rf = 0,84).38 Следует иметь в виду, что обнаружение тетрагидроканнабинола только в смывах с кожи рук не является основанием для заключения, что данное лицо курило гашиш, поскольку возможно случайное соприкосновение с гашишем, о котором освидетельствуемый и не подозревал. Выявление каннабиноидов в слюне курильщика гашиша.

Отбор проб. У лиц, подозреваемых в курении гашиша, в склянку с притертой пробкой вместимостью 100 мл отбирают примерно 10 мл слюны, после чего промывают полость рта 50 мл 70%-ного этилового спирта, который насыщен хлористым натрием (последний вводят для предупреждения глотания спирта). Слюну и смыв объединяют, склянку закрывают, опечатывают и направляют на исследование в лабораторию. Изолирование. Полученную пробу смешивают с 50 мл насыщенного водного раствора хлорида натрия. Экстрагируют каннабиноиды 10 мл этилацетата. Время экстракции – 5 мин. Число экстракций – 3. Экстракт высушивают путем добавления 1-1,5 г безводного сульфата натрия. Затем фильтруют экстракт через бумажный фильтр и упаривают до нескольких капель. Хроматографическая очистка и обнаружение Весь полученный раствор наносят на пластинку “Силуфол”. Хроматографирование осуществляется в условиях, описанных выше. При этом следует учитывать, что отрицательный результат еще не является основанием для вывода, что данное лицо не употребляло гашиш, так как следы гашиша после его курения сохраняются в полости рта до 1 часа, а на коже – до 24 часов (если поверхность кожи не подвергалась протиранию растворителями типа одеколона, этилового спирта). Выявление каннабиноидов в плазме крови. 5 мл плазмы крови экстрагиуют четырехкратно по 5 мл смеси петолейного эфира, содержащего 1,5% пентанола по объему. Объединенный органический экстракт упаривают до объема нескольких капель и переносят на пластинку “Силуфол”. Хроматографируют в тех же условиях, что и экстракт из слюны.

50.Организация оказания специализированной помощи при острых отравлениях. Химико-токсикологические лаборатории Центров по лечению острых отравлений, их задачи. Специфика проведения химико-токсикологического анализа в условиях оказания экстренной медицинской помощи.

Медицинская помощь больным с острыми химическими отравлениями (далее - медицинская помощь) оказывается в виде: первичной медико-санитарной помощи; скорой, в том числе скорой специализированной, медицинской помощи; специализированной медицинской помощи.

Медицинская помощь оказывается в форме: экстренной - при острых химических отравлениях, представляющих угрозу жизни больного с острыми химическими отравлениями; неотложной - при острых химических отравлениях без явных признаков угрозы жизни больного с острыми химическими отравлениями.

Врачи-токсикологи, работающие в специализированных центрах и отделениях, должны владеть основными методами реанимации и интенсивной терапии, а также знать клиническую фармакологию, биохимию, общие и частные вопросы токсикологии. В практике работы врачей амбулаторно-поликлинических учреждений, скорой медицинской помощи, психоневрологических и наркологических диспансеров нередки случаи оказания помощи больным при острых отравлениях. Систематическое повышение их знаний по вопросам токсикологии осуществляется в ряде институтов усовершенствования врачей, что способствует улучшению качества и эффективности помощи при острых отравлениях.

Химико - токсикологическая лаборатория (далее - Лаборатория) создается в составе Центра (отделения) острых отравлений.

В задачи ХТЛ входит: 1) Многократный анализ биологических жидкостей (крови, мочи) с целью определения эффективности метода детоксикации; 2) Помощь врачу в диагностике отравления ядовитыми соединениями; 3) Определение степени и стадии отравления ядовитым веществом (резорбции, элиминации) при поступлении больного в токсикологический центр.

Методы, которые используются в химико-токсикологическом анализе самые разнообразные. Метод скрининга, используемый при "ненаправленном" анализе, т.е. при анализе на неизвестное вещество. Первый этап скрининга ставит своей целью получение наименьшего количества ложноотрицательных результатов.

В качестве основных предварительных скрининговых методов для обнаружения используются химические (хромогенные, микрокристаллические реакции), иммунохимические методы (ИФА, РИА, ПФИА и др.) и тонко- слойная хроматография. При проведении химико-токсикологического анализа (ХТА) в лабораториях Центров острых отравлений необходимо получить как можно больше информации о природе токсикантов в короткий срок при минимальном объѐме образца, содержащего большое количество примесей. В качестве предварительного метода исследования в таких лабораториях в наибольшей степени подходит экспрессный, селективный, чувствительный, доступный и экономически выгодный метод тонкослойной хроматографии. В качестве подтверждающих методов исследования используются ГЖХ, ВЭЖХ, ГХ/МС.

ОТБОР И ПОДГОТОВКА ПРОБЫ К АНАЛИЗУ На стадии пробоподготовки образец очищается от загрязнений, которые не следует отбрасывать, так как они могут быть источником дополнительной информации.

Наиболее распространенными биологическими объектами для обна- ружения являются моча и кровь человека, рвотные массы, промывные воды желудка, диализаты

Моча представляет собой один из самых информативных объектов, так как большинство наркотических веществ и их метаболиты выводятся из организма с мочой, химический состав мочи позволяет до минимума сократить пробоподготовку. Рвотные массы, промывные воды как объект анализа могут содержат не поступившие в организм остатки токсиканта (остатки таблеток, косточки 11 плодов и др.). Кровь как объект анализа является наиболее информативной субстанцией несущем информацию о действии токсиканта на организм в данный момент, т.е. установленная концентрация токсиканта в крови определяет степень отравления.

ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ АНАЛИЗА БИОЛОГИЧЕСКИХ 12 ОБЪЕКТОВ Используя полученные результаты, аналитик-токсиколог должен не только подтвердить или опровергнуть предположение о присутствии одурманивающего средства в анализируемом образце,
51.Основные методы естественной и искусственной детоксикации при острых отравлениях: гемосорбция, гемодиализ и др. Методы антидотной терапии.

Детоксикация — разрушение и обезвреживание различных токсических веществ химическими, физическими или биологическими методами. Методы детоксикации: естественные и искуственные. Естественные методы детоксикации: 1) естественные: цитохромоксидазная система печени — окисление, иммунная система — фагоцитоз, связывание с белками крови, экскреторная — выведение с помощью печени, почек, кишечника, кожи и легких. 2) стимулированные: применение медикаментозных и физиотерапевтических методов, стимулирующих естественные методы детоксикации. Искусственные методы детоксикации: 1) физические- механическое удаление из организма токсических веществ посредством очистки кожи, слизистых оболочек и крови современными методиками: а) сорбционными — гемосорбция, энтеросорбция, лимфосорбция, плазмосорбция; б) фильтрационными методиками — гемодиализ, ультрафильтрация, гемофильтрация, гемодиафильтрация; в) аферезные методы — плазмаферез, селективная элиминация (криоседиментация, гепаринкриоседиментация). 2) химические - связывание, дезактивация, нейтрализация и окисление (антидоты, сорбенты, антиоксиданты, непрямое электрохимическое окисление, квантовая гемотерапия). 3) биологические — введение вакцин и сыворотки крови. Гемосорбция - методика, позволяющая удалять из крови пациента токсические продукты вне организма. Кровь контактирует с сорбентом, который обладает свойствами абсорбции и адсорбции. В настоящее время гемосорбция проводится с применением сорбентов двух основных групп. Неселективные сорбенты (например, активированы й уголь) применяются для удаления из крови нескольких веществ. Эффективны неселективные сорбенты для выведения из организма индолов, скатолов, избытка жирных кислот и билирубина, органических кислот. Селективные сорбенты

Гемодиализ — метод внепочечного очищения крови при острой ихронической почечной недостаточности. Во время гемодиализа происходит удаление из организма токсических продуктов обмена веществ, нормализация нарушений водного и электролитного балансов.

Антидоты (противоядия) - применяемые при лечении отравлений лекарства, в основе механизма действия которых лежит обезвреживание яда или предупреждение и устранение вызываемого им токсического эффекта.

Действие антидотов может заключаться:

1) в связывании яда (путем химических и физико-химических реакций);

2) в вытеснении яда из его соединений с субстратом;

3) в возмещении биологически активных веществ, разрушенных под влиянием яда;

4) в функциональном антагонизме, противодействии токсическому эффекту яда.

Антидотная терапия широко применяется в комплексе лечебных мероприятий при профессиональных отравлениях. Так, для предупреждения всасывания яда и его удаления из желудочно-кишечного тракта используются антидоты физико-химического действия, например активированный уголь, адсорбирующий па своей поверхности некоторые яды (никотин, таллий и др.). Другие антидоты оказывают обезвреживающее действие, вступая с ядом в химическую реакцию, путем нейтрализации, осаждения, окисления, восстановления или связывания яда. Так, метод нейтрализации используется при отравлениях кислотами (вводят, например, раствор окиси магния - жженой магнезии) и щелочами (назначают слабый раствор уксусной кислоты). Примером противоядия, действующего путем окисления, может служить калия перманганат, активный при отравлениях фенолом.

 

52.Пестициды. Общая характеристика. Народно-хозяйственное значение. Физико-химические свойства. Токсичность. Закономерность поведения в организме. Рецепторная связь.

Название пестициды происходит от двух латинских слов «pestis»-зараза, «cido» - убиваю. Под пестицидами, или ядохимикатами, принято понимать химические в-ва, применяемые в целях борьбы с различного рода вредителями с/х культур и продуктов, а также в целях повышения урожайности с/х культур. КЛАССИФИКАЦИЯ ЯДОХИМИКАТОВ: Известно несколько классификаций ядохимикатов. Они подразделяются на группы и подгруппы в зависимости от: - использования (назначения); - характера проникновения пестицидов в организмы насекомых, сорных растений и вредных животных; - внешнего проявления токсического действия (характер действия); - накопления (кумуляции) их в организме; - химической природы. Все пестициды можно разделить на 2 большие группы: 1. Неорганические пестициды. 2. Органические пестициды: - форм применения пестицидов; - токсичности; - персистентности. Кроме указанных, существует гигиеническая классификация пестицидов. Ядохимикаты широко используются в народном хозяйстве как эффективные средства борьбы с вредителями и болезнями растений, защиты животных от паразитов. Ядохимикаты также применяются для борьбы с грызунами, переносчиками болезней (малярия, энцефалит, сыпной и возвратный тиф, сонная болезнь и др.). Некоторые химические средства применяются как стимуляторы роста растений, как средства, тормозящие прорастание корнеплодов и клубнеплодов при их длительном хранении, и т.д. Пестициды проявляютвысокую физиологическую активность не только в отношении вредных организмов, но многие из них обладают высокой токсичностью для людей и животных. Критериями токсичности пестицидов явл-ся величины токсических и смертельных доз при разных путях поступления в организм – через кожу, легкие или желудочно-кишечный тракт.

53.Классификация пестицидов.

Известно несколько классификаций ядохимикатов. Они подразделяются на группы и подгруппы в зависимости от:

- использования (назначения);

- характера проникновения пестицидов в организмы насекомых, сорных растений и вредных животных;

- внешнего проявления токсического действия (характер действия);

- накопления (кумуляции) их в организме;

- химической природы. Все пестициды можно разделить на 2 большие группы:

1. Неорганические пестициды.

2. Органические пестициды

- форм применения пестицидов;

- токсичности;

- персистентности;

ХЛОРОРГАНИЧЕСКИЕ ПЕСТИЦИДЫ (ХОП)

1. Группа ДДТ (инсектициды) 4,4-дихлордифкнилтрихлорметан

2. Группа гексахлорциклогексана (инсектициды) – гексахлорциклогексан

3. Группа полихлорциклодиенов (инсектициды и стимуляторы роста растений) - гептахлор

1,4,5,6,7,8,8-гептахлор-4,7-эндометилентетрагидроинден

Хлорорганические пестциды по химической природе представляют собой хлорпроизводные ароматических углеводородов, циклопарафинов. К ним относятся: гексахлорбензол, гексахлорбутадиен, ДДТ, ДДД,дилор, кельтан, метоксихлор и др. Им присуща сверх- и выраженная кумуляция. Плохо растворимы в воде, хорошо в – органич раствор-лях, жирах. ДДДактивный инсектицид, для теплокровных особенно опасна его высокая хроническая токсичность. Эти соед-я обладают эмбриотоксическим действием, вызывают пороки развития и мутагенные изменения. Изолирование – проводится путем экстракции малополярным органич растворителем (гексан, бензол, эфир). Возможно предварит-ое подкисление биоматериала разведен серной кислотой для ослабления связи с белками. Очистка: 1.Адсорбционная хроматография (сорбенты – диатомит, силикагель, оксид алюминия). 2.Тонкослойная хромат. 3.Обработка органического экстракта концентрир серной кислотой (сульфирование). Органические соэкстрактивные в-ва при этом разруш-ся, продукты их распада остаются в слое кислоты, который отделяют и не исслед, после чего органич фазу промывают водой. Идентификация: 1.Дехлорирование с послед-м обнаружением продуктов реакции. (воздействуют спиртов р-ом щелочи или алкоголята натрия). Отщепл-ся разное кол-во хлора. Реакция на хлорид-ион и ароматич соед-ие. Реакция (стр 18 желтой методички). 2.Реакция Витали-Морена. (стр 19). 3.Физико-химич методы: 1.ТСХ на пластинках с силикагелем и оксидом алюминия, детектирование – обработка пластин водно-ацетонов раствором серебра нитрата с послед-м облучением УФ-светом. Серо-черные пятна (восстановление серебра). 2.ГЖХ – детектор – электронно-захватный. Колич опред: 1.Аргентометрия по иону хлора после его отщепления. 2.Спектрофотометрия в видимой области спектра (по реакции Витали-Морена). 3.Хромат методы (ТСХ,ГЖХ). Фосфорорганические пестициды – к ним относят: афуган, актеллик, дибром, карбофос, бромофос, фталофос, хлорофос, цидиал и др. Большинство – высоколетучи, слабо раств в воде, хорошо в орган раств-лях. Способны проникать через неповрежд кожу, биологич мембраны, гематоэнцефалич барьер. Обладают кумулятивным свойством в рез-те суммирования токсических эффектов – функцион-ой кумуляцией. Изолирование – объекты исследования – сами ядохимикаты и биол объекты - желудок с содержимым, печень, почки при смертельных отравлениях и биол жид – кровь, моча живых лиц, пищевые продукты, почва, вода. Изолир-е из биол мат-в осущ-ся экстракцией различными органичес растворителями: пентан, н-гексан, гептан, петролейный эфир, эфир, хлороформ, четыреххлористый углерод и др. Методы: 1.Извлечение липофильными органич растворит6 гексаном, бензолом, эфиром, хлороформом, четыреххлористым углеродом. От 30 до 60% извлекается. Выход увелич с уменьшением значения рН.
54.Методы изолирования фосфорорганических и хлорорганических пестицидов из различных биологических объектов, идентификации и количественного определения.

Принцип метода

Метод основан на хроматографии хлорсодержащих пестицидов в тонком слое окиси алюминия, силикагеля или пластинок «Silufol» в различных системах подвижных растворителей после экстракции их из исследуемых образцов и очистке экстрактов. Подвижным растворителем служит гексан или гексан в смеси с ацетоном. Места локализации препаратов обнаруживают после опрыскивания пластинок раствором аммиаката серебра с последующим УФ-облучением или после облучения ультрафиолетовым светом пластинок «Silufol», содержащих о-толидин.