Хроматографические методы анализа

Хроматографические методы анализа основаны на разделении смеси веществ в хроматографических колонках и детектировании фракций смеси, вышедшей после колонки. Процесс разделения осуществляется за счет прохождения в колонке следующих процессов:

- связывание вещества на неподвижной фазе (сорбция)

- освобождение вещества с неподвижной фазы в подвижную фазу

- перенос вещества вдоль колонки.

Результаты анализа фиксируются в виде хроматограммы, которая представляет собой функцию интенсивности пика от времени выхода. Более корректно называть хроматограмму профилем элюирования.

Основной способ применения хроматографических методов при производстве лекарственных препаратов - анализ содержания основного вещества, примесей, содержание остаточных растворителей. Часто хроматография используется при определении показателя «подлинность» с применением соответствующих стандартов веществ. Корректное определение показателя «содержание основного вещества и примесей» также невозможно без применения стандартных образцов.

При контроле качества биофармацевтической продукции, биополимеров хроматография используется при определении молекулярно-массового распределения.

К настоящему времени многие виды хроматографии существуют в виде отдельных инструментальных методов анализа:

- газовая хроматография

- газовая хроматография с масс-спектрометрическим детектором (GS-MS)

- высокоэффективная жидкостная хроматография

- жидкостная хроматография низкого давления

- жидкостная хроматография с масс-спектрометрическим детектором (LS-MS)

- хроматография в надкритических условиях

Газовая хроматография. Данный вид исследований используется в следующих видах анализа:

1. Определение этилового спирта в фармацевтических препаратах

2. Определение остаточных количеств растворителей

Газовый хроматограф должен быть оснащен следующими блоками:

- испаритель

- детектор

- термостат

- хроматографическая колонка

- источник газа-носителя

- генератор чистого водорода (для пламенно-ионизационного детектора)

- безмаслянный компрессор

- система управления и контроля (компьютер)

При выборе и использовании газового хроматографа для целей фармацевтического анализа необходимо понимать, что 90-95% задач решаются приборами, оснащенными, как правило, пламенно-ионизационными детекторами (реже масс-спектрометрическими детекторами)

Для организации работы прибора необходим источник газа-носителя (азот или гелий), а также генератор водорода, используемый в работе пламенно-ионизационного детектора.

Для целей фармацевтического анализа наиболее эффективны капиллярные колонки. Реже используются набивные колонки.

Жидкостная хроматография. Используется для анализа профиля (идентификации и количественного определения) примесей органических веществ в фармацевтическом производстве. Метод ВЭЖХ (высокоэффективная жидкостная хроматография) применяется в большинстве случаев для определения средне- и малолетучих веществ. Предел обнаружения в стандартных методиках составляет 10^-2 - 10^-9 %.

Жидкостный хроматограф должен быть оснащен следующими блоками:

- устройство ввода пробы

- насос (с дегазатором)

- термостат

- хроматографическая колонка

- детектор

- система управления и контроля (компьютер)

- система пробоподготовки

- система дистилляции

Для оценки содержания примесей в ЛС методом ВЭЖХ используют полуколичественный и количественный методы. Полуколичественный метод - относительная оценка загрязнения препарата, т.е. сумма всех пиков (исключая пик растворителя) на хроматограмме принимается за 100%, и вычисляется процентное содержание основного вещества и сумма процентов примесей. Такой метод применим, если лекарственный препарат содержит только одно действующее вещество, и если содержание примесей регламентируется до 0,1%.

Количественное определение производится в абсолютных единицах и требует наличия стандартных образцов. Официальный СО - фармакопейный стандарт (государственный стандартный образец - ГСО). Это особая серия (партия) лекарственного вещества, приготовленная определенным образом. ГСО может быть изготовлен либо независимым синтезом, либо с использованием дополнительной очистки получаемого вещества. Такое вещество является основой для создания рабочего стандартного образца (РО). Рабочий стандартный образец - лекарственное вещество установленного качества и чистоты, полученное с помощью основного стандарта и используемое как стандартное вещество в анализе определенных серий, новых лекарственных веществ и новых лекарственных препаратов.