Определение глюкозы (в присутствии фруктозы) по Вильштеттеру

 

Метод основан на способности I₂ в щелочной среде окислять только альдегидоспирты, не влияя на кетоноспирты.

Реакция идет согласно суммарному уравнению:

Если внести излишек I₂, то непрореагировавший остаток можно определить в кислой среде титрованием Na₂S₂O₃.

Это уравнение состоит из двух реакций:

.

Ход определения

В две колбы а и б вносят по 20 мл 0,1 н раствора I₂; в колбу а (проба) добавляют 10 мл вытяжки (около 100 мг); в колбу б (контроль) прибавляют 10 мл дистиллированной воды; в обе колбы по каплям прибавляют по 10 мл 0,5 н раствора КОН, все время помешивая; оставляют на 15 мин.

Через 15 мин в обе колбочки добавляют по 10 мл 10%-ного раствора H₂SO₄ и титруют 0,1 н раствором Na₂S₂O₃ до слабо-желтой окраски, добавляют 2-3 капли раствора крахмала и титруют до обесцвечивания фиолетовой окраски.

1 мл 0,1 н раствора I₂(Na₂S₂O₃) соответствует 9,0 мг глюкозы.

Количество глюкозы во взятой смеси равняется

С = (В – А) К × 9,0,

где В – количество 0,1 н раствора Na₂S₂O₃, затраченное на титрование контроля;

А – количество 0,1 н раствора Na₂S₂O₃, затраченное на титрование пробы;

К – коэффициент поправки на 0,1 н раствор Na₂S₂O₃.

Чтобы найти фруктозу, нужно из данных, определенных по Бертрану  до гидролиза (глюкоза + фруктоза), вычесть данные поглюкозе (данные по Вильштетеру)

Для определения общей кислотности вытяжки берут 25 мл (до гидролиза) и оттитровывают при индикаторе фенолфталеин 0,1 н раствором NaOH до слабо-розовой окраски. Обычно кислотность выражается в миллилитрах 0,1 н раствора NaOH, пошедшего на титрование кислот, содержащихся в навеске.

5. Витамин «С» определяется с 2,6-дихлорфенолиндофенолом. Для определения в коническую колбу отмеривают пипеткой 10 мл вытяжки (до гидролиза) и оттитровывают 0,001 н раствором натриевой соли 2,6-дихлорфенолиндофенола до слабо-розового окрашивания, удерживающегося в течение полминуты. Количество витамина С вычисляют, учитавая, что 1 мл 0,001 н раствора натриевой соли 2,6-дихлорфенолиндофенола соответствует 0,088 мг аскорбиновой кислоты (М экв. к-ты = 176, грамм- эквивалент = 88 г), а разведение и количество исходного вещества

С – количество витамина С;

Х – количество мл 0,001 н раствора 2,6-дихлорфенолиндофенолята натрия;

250 – общее количество водной вытяжки; 10 – аликвота;

25.000 – навеска яблока, (мг).

 

 

Т А Б Л И Ц А (для определения глюкозы)

Глюкоза, мг	Медь, мг	Глюкоза, мг	Медь, мг	Глюкоза, мг	Медь, мг
10	20,4	41	79,3	71	131,4
11	22,4	42	81,1	72	133,1
12	24,3	43	82,9	73	134,7
13	26,3	44	84,7	74	136,3
14	28,3	45	86,4	75	137,9
15	30,2	46	88,2	76	139,6
16	32,2	47	90,0	77	141,2
17	34,2	48	91,8	78	142,8
18	36,2	49	93,6	79	144,5
19	38,1	50	95,4	80	146,1
20	40,1	51	97,1	81	147,7
21	42,0	52	98,9	82	149,3
22	43,9	53	100,6	83	150,9
23	45,8	54	102,3	84	152,5
24	47,7	55	104,1	85	154,0
25	49,6	56	105,8	86	155,6
26	51,6	57	107,6	87	157,2
27	53,4	58	109,3	88	158,8
28	55,3	59	111,1	89	160,4
29	57,2	60	112,8	90	162,0
30	59,1	61	114,5	91	163,6
31	60,9	62	116,2	92	165,2
32	62,8	63	117,9	93	166,7
33	64,4	64	119,6	94	168,3
34	66,5	65	121,3	95	169,9
35	68,3	66	123,0	96	171,5
36	70,1	67	124,7	97	173,1
37	72,0	68	126,4	98	174,6
38	73,8	69	128,1	99	176,2
39	75,7	70	129,8	100	177,8
40	77,5

 

Т А Б Л И Ц А

Сахар, мг	Медь, мг	Сахар, мг	Медь, мг	Сахар, мг	Медь, мг	Сахар, мг	Медь, мг
10	20,6	33	64,8	56	105,7	79	143,7
11	22,6	34	66,7	57	107,4	80	145,3
12	24,6	35	68,5	58	109,2	81	146,9
13	26,5	36	70,3	59	110,9	82	148,5
14	28,5	37	72,2	60	112,6	83	160,0
15	30,5	38	74,0	61	114,3	84	151,6
16	32,5	39	75,9	62	115,9	85	153,2
17	34,5	40	77,7	63	117,6	86	154,8
18	36,4	41	79,5	64	119,2	87	156,4
19	38,4	42	81,2	65	120,9	88	157,9
20	40,4	43	83,0	66	122,6	89	159,5
21	42,3	44	84,8	67	124,2	90	161,1
22	44,2	45	86,5	68	125,9	91	162,6
23	46,1	46	88,3	69	127,5	92	164,2
24	48,0	47	90,1	70	120,2	93	165,7
25	49,8	48	91,9	71	130,8	94	167,3
26	51,7	49	93,6	72	132,4	95	168,8
27	53,6	50	95,4	73	134,0	96	170,3
28	55,5	51	97,1	74	135,6	97	171,9
29	57,4	52	98,8	75	137,2	98	173,4
30	59,3	53	100,6	76	138,9	99	175,0
31	61,1	54	102,3	77	140,5	100	176,5
32	63,0	55	104,0	78	142,0	-	-

 

Контрольные воросы к отчету по теме “Углеводы”

 

1. Напишите проекционные формулы Хеуорса для a- и b-форм галактозы. В чем состоит основное различие между этими формами?

2. Напишите формулу дисахарида лактозы в двух аномерных формах a и b.

3. Почему не обнаружены аномерные формы сахарозы? Напишите формулу сахарозы.

4. В чем различие в строении гликогена и целлюлозы?

5. Какова формула нейраминовой кислоты?

6. Что такое глюкозиды? Каковы формулы амигдалина, гликованилина, синигрина?

7. К какому классу соединений относятся хитин, пектиновые вещества, гемицеллюлоза? Какие структурные единицы и связи содержат эти соединения?

8. Укажите нахождение, состав, рассмотрите строение гиалуроновой кислоты, гепарина.

9. Напишите формулы хондриотинсульфата А, хондриотинсульфата В.

10. Каким путем происходит превращение углеводов в органах пищеварения? Как расщепляются олиго- и полисахариды? Опишите действие ферментов.

11. Каким путем всасываются моносахариды?

12. Как происходит взаимопревращение моносахаридов?

13. Рассмотрите биосинтез гликогена, укажите, какова роль уридиндифосфата (УДФ) в биосинтезе гликогена.

14. Какова роль полипренилфосфатов в биосинтезе полисахарида?

15. Как происходит регуляция постоянства содержания глюкозы в крови? Какова роль печени в регуляции сахара?

16. Гормональный механизм регуляции глюкозы в крови. Какова роль центральной нервной системы?

17. Анаэробное превращение углеводов.

18. Гликолиз и гликогенолиз. Механизм. Энергетическое значение.

19. Гликонеогенез – общий путь биосинтеза моносахаридов и полисахаридов у человека и животных. Запишите уравнения реакций глюконеогенеза.

20. Спиртовое брожение. Механизм. Его отличие от процессов гликолиза.

21. Пентозный цикл и его роль.

22. Окислительное декарбоксилирование пировиноградной кислоты (аэробное превращение).

23. Цикл Кребса – центральный путь метаболизма. Химизм.

24. Энергетическая роль цикла Кребса.

 

Занятие 6. Липиды

 

  Липиды наряду с углеводами и белками являются основными компонентами клетки. Функции, выполняемые липидами в организме, разнообразны: они являются структурными компонентами биологических мембран. Липиды – это также энергетический материал для организма: они служат формой, в которой депонируются запасы метаболического топлива, выполняют защитную функцию.

  Липиды представляют собой нерастворимые в воде маслянистые или жирные вещества, которые могут быть экстрагированы из клеток неполярными органическими растворителями (эфиром, хлороформом, бензолом, четыреххлористым углеродом).

  При изучении липидов следует обратить внимание на то, что в отличие от других классов биомолекул – белков и углеводов, липиды неоднородны в химическом отношении.

   Липиды классифицируют в соответствии с их химическим строением (см. схему).

      Студент должен знать химические и биологические свойства важнейших представителей всех классов липидов.Обмен липидов включает следующие основные процессы: переваривание и всасывание липидов, окисление глицерина и жирных кислот, образование ацетоновых (кетоновых) тел, биосинтез липидов. При рассмотрении вопроса о пищеварении и всасывании липидов следует помнить, что основная их масса в пище представлена жирами (триацилглицеринами), меньше – фосфолипидами и стеридами. В переваривании и всасывании липидов очень важную роль играют гидролитические ферменты (липазы, эстеразы, холестеразы) и желчные кислоты. Нужно знать, какие продукты получаются при гидролизе липидов, какие ферменты действуют на определенных стадиях гидролиза, какова роль желчных кислот.