2020-01-14
88
Дерматомиозиты - системное заболевание соединительной ткани, при котором преимущественно поражается кожа и мышечная ткань. Разнообразные поражения кожи с патогмоничным периорбитальным отеком с пурпурно-лиловой эритемой сочетаются с миастеническим синдромом, миокардиодистрофией, полиартритом и присоединяющимся воспалением легких (гиповентиляционного и аспирационного генеза). Особого внимания заслуживает высокая частота сочетания дерматомиозита со злокачественными опухолями. Полимиозиты - системные воспалительные миопатии без существенного поражения кожи, представляющие группу заболеваний, характеризующиеся диффузным поражением мускулатуры вследствие периваскулярной и интерстициальной инфильтрации мышечной ткани воспалительными клетками, преимущественно лейкоцитами.
6. АУТОАНТИТЕЛА КАК СЕРОЛОГИЧЕСКИЕ МАРКЕРЫ СИСТЕМНЫХ КОЛЛАГЕНОЗОВ.
Впервые проявления специфического LE- феномена было зарегистрировано в 1948 г в процессе инкубации сывороток различных пациентов со взвесью лейкоцитов нормальных доноров. Годом позже был идентифицирован сывороточный иммуноглобулин, осуществляющий антинуклеарную реакцию, лежащую в основе LE-феномена. Определение LE- клеток доминировало в 50- 70 годы как основная реакция выявления антинуклеарных антител (ANA).
В 80-х годах для выявления ANA был предложен метод непрямой иммунофлуоресценции, с тестированием сыворотки пациентов на срезах тканей почек и печени кролика (мыши), либо на культуре раковых эпителиоидных клеток человека (Hep-2). Метод зарекомендовал себя как высокочувствительный и специфичный, позволяющий регистрировать одновременное присутствие аутоантител к почти 40 отдельным ядерным антигенам. Особенности характера распределения специфического свечения при учете реакции (гомогенное, крапчатое, периферическое, связанное с ядрышками или с центромерами, наличие цитоплазматических связывающих фокусов) позволяет в первом исследовании определить основную антигенную специфичность выявляемых аутоантител. К недостаткам данного метода следует отнести относительную трудоемкость, зависимость от оптических характеристик люминисцентного микроскопа, а также проблемы стандартизации и контроля качества, в основном связанные с использованием тканей животных или клеточных культур.
Одновременное развитие получил метод использования твердофазного ИФА как для выявления суммарного комплекса антинуклеарных аутоантител (ANA- скрининг), так и для выявления отдельных аутоантител к экстрагируемым ядерным антигенам (ENA-скрининг и ENA-профиль). Достоинствами метода являются возможность автоматизации и высокая производительность. Чувствительность и специфичность сравнима с РНИФ, правда использование в некоторых тест-системах рекомбинантных антигенов потенциально может вызывать ложно положительные результаты при тестировании сывороток с высоким титром антибактериальных антител.
Другие известные методы идентификации аутоантител к ENA - иммунодиффузия в геле, иммуноэлектрофорез, гемагглютинация, иммунопреципитация и иммуноблотинг широкого применения в практике клинической лаборатории пока не получили.
Перечень наиболее важных аутоантител к экстрагируемым ядерным антигенам представлены в таблице 5:
Таблица 5. Основные серологические маркеры аутоиммунных заболеваний
| Антиген | Оригинальное название | Молекулярная структура | Функция | Диагностическое значение |
| Sm | Smith (имя пациента) | Комплекс, сформированный из 9 протеинов с 13 малыми молекулами РНК | Расщепление предшественников матричной РНК | *Cпецифичность к СКВ *Sm + и RNP + = высокий риск люпус- нефрита *Может выявляться при отсутствии dsDNA. |
| Sm/RNP комплекс | RNP - частицы рибонуклео-протеина | Нативный комплекс Sm и RNP антигенов | Расщепление предшественников матричной РНК | СКВ, синдром Шегрена, склеродермия, полимиозит, СБСТк |
| U1RNP | основной антиген (68 rDa) комплекса U1RNP | Всегда находится в паре с RNA U1. | Расщепление предшественников матричной РНК | * RNP +, Sm - = низкий риск нефрита * высокие титры на фоне "отр" других ANA = СБСТк |
| SSA или Ro | Растворимая (soluble) субстанция (substance) А или протеин А синдрома Шегрена или Robert-антиген (имя пациента) | протеины 52 и 60 кД связанные с молекулами цитоплазматической РНК | Неизвестно | *синдром Шегрена и СКВ *блокада сердца новорожденных в результате трансплацентарного перехода антител *SSA +, SSB+ = низкий риск нефрита *SSA+, SSB - = высокий риск нефрита |
| SSB или La | Растворимая (soluble) субстанция (substance) В или протеин В синдрома Шегрена или Lane-антиген (имя пациента) | Фосфопротеины, связанные с транскриптами полимеразы III | Терминатор транскрипции хеликазы | *синдром Шегрена, СКВ *SSA +, SSB+ = низкий риск нефрита |
| dsDNA | Двух-цепочная ДНК | Нативная двух-цепочная ДНК свободная от протеинов | Носитель генетической информации | *СКВ, мониторинг течения * Вовлеченность ЦНС и почек |
| Histones | Гистоны | Базисные протеины, связанные с ДНК | Структурные элементы хроматина | Лекарственная СКВ |
| CENP-B | Протеин (protein) центромеры | Протеин кинетохора 80 кД | Место прикрепления микрофиламентов | Склеродермия, КРЕСТ-синдром |
| Jo l | Специфический протеин 1 больного с миозитом | Протеин 55кД, гистидин-тРНК синтетаза | Соединение тРНК с гистидином | * Полимиозит более характерен, чем дерматомиозит * Ассоциирован с интерстициальной пневмонией |
| PM-Scl-100 | 100 кД антиген полимиозита-склеродермы (polyniyositis -scleroderma) | Часть мультипротеинового комплекса с содержанием не менее 11 протеинов | Синтез рибосомального предшественника | Полимиозит-склеродермо-КРЕСТ- синдром |
| Scl-70 | 70 rL антиген склеродермы (scleroderma) | 70 кД продукт деградации протеина с массой 100 кД | Топоизомераза I Денатурация ДНК (раскручивание) | *Склеродерма и реже КРЕСТ -синдром |
В дифференциальной диагностике основных коллагенозов важное значение придается анализу маркеров аутоиммунных заболеваний выявленных как методом иммунофлуоресценции, так и в ИФА (табл. 6).
Таблица 6
|
Тип патологии | Результаты иммунологического исследования | Клиническая ценность |
| Тип антител и частота их встречаемости (%) | ||
| Системная красная волчанка | * ANA 95-99% * dsDNA 50-75% *Sm 30% * RNP 25-40% *SSA(Rо) 30-40% * SSB(La) 10-15% * антифосфолипидные антитела 30-50% * PCNA 2-10% *анти-Кu (Кi) 10% | ANA и ENA - скрининг (выявление); анти-nDNA и анти-Sm — маркеры мониторинга |
| Дискоидная красная волчанка | Картина нормы (как правило, нормальные титры ANA) | LE-полосы в биоптатах кожи (в РПИФ) высокоспецифичны |
| Подострая кожная красная волчанка | * ANA 70% • SSA (Ro) > 60% | анти-SS-А(Rо) высокоспецифичны |
| Красная волчанка новорожденных | *ANA 70% • SS-А(Ro) 60% * SS-B(La) 60% | Анти-SS-А(Rо) высокоспецифичны |
| "Лекарственная" красная волчанка | *ANA > 90% * антитела против гистонов > 90% Остальные ANA и анти-ENA отсутствуют | антигистоновые антитела высокоспецифичны при отсутствии других ядерных антител |
| Смешанное заболевание соединительной ткани | • ANA (крапчатый тип окрашивания) > 95% • анти-RNP > 90% | Ценную диагностическую информацию дает характер окрашивания ядер в биоптатах кожи и при исследовании сыворотки крови методом непрямой иммунофлуоресценции |
| Синдром Шегрена | • ANA 55%. *SS-A(Ro) 43-88%.*SS-B(La) 14-60% Присутствие ревматоидного фактора(RF) | Диагноз подтверждается положительными данными серологических исследований |
| Склеродермия | • ANA 85% (Крапчатый или ядрышковый тип окрашивания) CREST: *антицентромерные антитела 70-90% Диффузный склероз: • анти-Sсl -70 45% Акросклероз: • анти-Scl-70 15-20% | *Антицентромерные антитела -маркер КРЕСТ- синдрома *Scl-70 — маркер склеродермии Диагностическая ценность прямой иммунофлуоресценции биоптатов кожи невелика |
| Полимиозит дерматомиозит | Общий признак: • ANA 80% Дерматомиозит: • анти-Jo-l 10% Полимиозит: • анти-Jo-l 30% • SS-А(Rо) 55% • анти-Кu(Кi) 10% (также наблюдаются при склеродермии) | Положительные результаты серологического исследования могут использоваться для подтверждения диагноза |
| Ревматоидный артрит | • ANA низкие титры или отсутствие • RF 90% • RANA 70-90% (присутствует в 95% сывороток не содержащих RF) | Результаты серологического исследования используются для подтверждения диагноза |
