2020-04-12
153
Принцип. Глюкоза в присутствии глюкозо-оксидазы окисляется кислородом воздуха до глюконовой кислоты и перекиси водорода, который при наличии пероксидазы вступает в реакцию с фенолом и 4-аминофеназоном с образованием хинонимина красно-фиолетового цвета.
Реактивы. 1. Раствор ферментов (пероксидаза) ч., хч;
2. Фосфатный буферный раствор (рН 7,4), чда;
3. Антикоагулянт (сухая смесь 0,536 г натрия щавелевокислого и 3,4 г натрия хлорида), чда;
4. Калибровочный раствор, содержащий 10,0 ммоль/л глюкозы, чда.
Для исследования используют набор реактивов выпускаемых фирмами «Филисит» и «Реагент».
Приготовления рабочего раствора. В колбу объемом 200 мл переносят содержимое флакона с буферным раствором, добавляют 100 мл дистиллированной воды и раствор ферментов, перемешивают. Потом доводят водой до метки и снова тщательно смешивают.
Приготовление раствора антикоагулянта. В колбу объемом 500 мл вносят сухую смесь актикоагулянта и добавляют 400 мл дистиллированной воды и тщательно перемешать.
Оборудование. Фотоэлектроколориметр, центрифуга, водяная баня, пипетки на 0,2; 0,5 и 2 мл, пробирки.
Ход определения. Для получения плазмы 0,1 мл крови смешивают с 0,9 мл антикоагулянта и центрифугируют 10 мин при 2000 об/мин.
Определение проводят по схеме, указанной в таблице
| Калибровочная проба | Исследуемая проба | Контрольная проба | |
| Калибровочный раствор | 0,02 | - | - |
| Плазма крови | - | 0,2 | - |
| Физ. раствор | 0,2 | - | 0,2 |
| Рабочий раствор | 2,0 | 2,0 | 2,0 |
| Все смешать, выдержать 20 мин при комнатной температуре или 12 мин в термостате (при 37 0С). Провести измерение оптической плотности исследуемой и калибровочной проб против контроля. | |||
Измерение производят при длине волны 500-546 нм в кювете с толщиной слоя 10 или 5 мм.
Расчет содержания глюкозы в плазме крови проводят по формуле:
С=10А/Б×К, где С – концентрация глюкозы, ммоль/л;
10 – постоянный коэффициент;
А – оптическая плотность исследуемой пробы;
Б – оптическая плотность калибровочной пробы
Примечание. Для получения объективных показателей определение уровня глюкозы в плазме необходимо проводить не позднее двух часов после взятия крови (хранить в термосе со льдом) или быстро осадить белки трихлоруксусной кислотой. При несоблюдении этих правил полученные данные будут занижены.
Клиническое значение. Понижение уровня глюкозы в крови – гипогликемия отмечается при недостаточном поступлении с рационом легкопереваримых углеводов, при тяжелой физической работе, при больших затратах на терморегуляцию (у новорожденных поросят). Кроме того, гипогликемия часто отмечается при кетозе, гепатодистрофии, алиментарной дистрофии, передозировке инсулина.
Увеличение концентрации глюкозы – гипергликемия бывает алиментарной (после скармливания моногастричным животным сахара), симптоматической (при стрессе, бешенстве и т.д.) и диабетической (при сахарном диабете).
Оценка дезинтоксикационной функции печени
Определение мочевины в сыворотки крови по Маршу
Принцип. Мочевина образует с диацетилмонооксимом в присутствии тиосемикарбазида и железа в кислой среде комплексное соединение, интенсивность окраски которой пропорциональна содержанию мочевины в сыворотки крови.
Реактивы. 1. 10 %-ный раствор трихлоруксусной кислоты, ч;
2. 0,25 %-ный раствор тиосемикарбазида, чда: 0,25 г реактива вносят в мерную колбу на 100 мл доливают дистиллированной водой до метки, смешивают;
3. 2,5 %-ный раствор диацетилмонооксимома, чда: готовят смешиванием 0,25 г реактива и 9,75 мл дистиллированной воды;
4. Основной раствор железа хлорида: растворяют 5 г железа хлорида (хч, чда) в 100 мл дистиллированной воды, после чего добавляют 1 мл концентрированной серной кислоты (хч); 5. Рабочий раствор железа хлорида: 1 мл основного раствора железа хлорида доводят до 100 мл дистиллированной водой в мерной колбе, добавляют 8 мл концентрированной серной кислоты и 1 мл 85 %-ной ортофосфорной кислоты. Храниться в темном месте до двух недель;
6. Цветной реактив: к 30 мл рабочего раствора железа хлорида добавляют 20 мл дистиллированной воды, 1 мл 2,5 %-ного раствора диацетилмонооксимома и 0,25 мл растора тиосемикарбазида. Готовят непосредственно перед исследованием.
7. Стандартный раствор мочевины: 0,5 г эталона растворяют в 1 литре дистиллированной воды – концентрация 8,33 ммоль/л.
Оборудование. Фотоэлектроколориметр, центрифуга, водяная баня, резиновые пробки, обвернутые фольгой, пипетки на 0,2; 1 и 2 мл, пробирки.
Ход определения. В центрифужную пробирку вносят 0,8 мл дистиллированной воды, 0,2 мл сыворотки крови и 1 мл трихлоруксусной кислоты, перемешивают и через 20 мин центрифугируют 20 мин при 3000 об/мин. В пробирку отбирают 0,5 мл надосадочной жидкости и добавляют 5 мл цветного реактива. Пробирку закрывают пробкой, обернутой фольгой и выдерживают в кипящей водяной бане точно 20 мин, быстро охлаждают под проточной водой. Не позднее чем как через 15 мин измеряют оптическую плотность пробы на фотоэлектроколориметре при длине волны 500-600 нм портив контроля в кювете с толщиной рабочего слоя 10 мм. Аналогичным образом обрабатывают 0,5 мл стандартного раствора мочевины и контроль – 0,5 мл дистиллированной воды.
Клиническое значение. Снижение уровня мочевины в сыворотке крови встречается довольно редко. Это свидетельствует об значительном поражении печени (потеря функциональной активности более 90 % гепатоцитов) или об алиментарном истощении животного.
Повышение концентрации мочевины характерно для нарушения выделительной функции почек. При острой почечной недостаточности ее уровень резко повышается при одновременном снижении мочевины в моче.
Оценка пигментной функции печени
