Отбор проб производят в соответствии с МУК 4.2.1018-01. Воду для санитарно-микробиологического исследования отбирают в стерильные емкости.
Из кранов водопроводных сетей отбор проб воды производят после предварительного фламбирования кранов и спуска воды в течение 10 мин при полном открытии крана.
Определение общего микробного числа воды. Общее микробное загрязнение определяется количеством микроорганизмов, содержащихся в 1 см3 воды, глубинным посевом на питательный агар. В водопроводной (или питьевой) воде в соответствии с СанПиН 2.1.4.1074-01 микробное число не должно превышать 50 КОЕ в 1 см3. В соответствии с требованиями ВОЗ (Всемирной организации здравоохранения) ОМЧ также определяют, инкубируя посевы при 37 и 22ºС.
Определение общих и термотолерантных колиформных бактерий методом мембранной фильтрации (основной метод). Общие колиформные бактерии (ОКБ) – грамотрицательные, оксидазоотрицательные, не образующие спор палочки, способные расти на дифференциальных лактозных средах, ферментирующие лактозу до кислоты, альдегида и газа при температуре (37 ± 1) °С в течение 24-48 ч.
Термотолерантные колиформные бактерии (ТКБ) входят в число общих колиформных бактерий, обладают всеми их признаками и, кроме того, способны ферментировать лактозу до кислоты, альдегида и газа при температуре (44 ± 0,5) °С за 24 ч.
Определение ОКБ и ТКБ методом мембранной фильтрации предполагает фильтрацию установленного объема воды через мембранные фильтры, выращивание посевов на дифференциальной питательной среде с лактозой и последующей идентификацией колоний по культуральным и биохимическим свойствам.
При исследовании питьевой воды анализируют 3 объема по 100 см3. При получении стабильных отрицательных результатов допустима фильтрация 300 см3 воды через один фильтр.
При фильтрации воды неизвестного качества целесообразно увеличение количества фильтруемых объемов для получения изолированных колоний на фильтре (например, 10, 40, 100, 150 см3 воды).
Отмеренный объем воды фильтруют через мембранные фильтры. По окончании фильтрации фильтр аккуратно снимают стерильным пинцетом и помещают в центр чашки Петри на поверхность среды Эндо фильтрующей поверхностью вверх. При этом следует избегать образования пузырьков воздуха между средой и фильтром. Чашки с фильтрами ставят в термостат и инкубируют посевы при температуре (37 ± 1) °С в течение (24 ± 2) ч (рис. 17). Если на фильтрах нет роста или выросли колонии пленчатые, губчатые, плесневые, прозрачные, расплывчатые, выдают отрицательный ответ: отсутствие ОКБ и ТКБ в 100 см3 исследуемой воды.
Рис. 17. Схема определения общих и термотолерантных колиформных бактерий методом мембранной фильтрации