2020-05-21
75
Панель скрининга человеческих цитокинов Treg 12 Plex Panel позволяет обнаруживать и количественно определять 12 биомаркеров воспаления цитокинов Treg. Для проведения анализа требуется всего лишь 12,5 мкл образца.
Уникальная и релевантная смесь мишеней – единственный доступный набор для анализа на основе гранул Luminex. В наборе единый коэффициент разбавления для всех целей и одноуровневый контроль. Бусины и наборы для соединения Bio-Plex COOH позволяют разрабатывать уникальные мультиплексные анализы на основе бус для новых цепей с использованием шариков с карбоксильным покрытием, готовых ковалентно связаться с любым белком или нуклеиновой кислотой.
Содержание в сыворотки крови 12 цитокинов (IL-2, IL-10, IL-12 (p40), IL-12 (p70), IL-19, IL-20, IL-22, IL-26, IL-27 (p28), IL-28/IFN-α2, IL-29/IFN-α1, IL-35 (34) оценивали методом проточной флюориметрии на 2-лучевом лазерном автоматизированном анализаторе Bio-Plex Protein Assay System (USA) c использованием коммерческих тест-систем 12-Plex (определяемый динамический диапазон 2-32000 пкг/мл) в соответствии с инструкцией фирмы-производителя.
Принцип метода:
Принцип Bio-Plex Pro Assay (Bio-Rad) аналогичен принципу сэндвич-структуры ИФА (ELISA), отформатированного для использования с магнитными микросферами. Антитела (АТ), специфичные к определенному аналиту, ковалентно иммобилизируются на микросферах. При нанесении биообразца, АТ вступают в реакцию с содержащимися в нем молекулами аналита. Магнитное поле позволяет надежно удерживать магнитные микросферы в емкости при промывке, исключая потерю образца. После серии промывок, направленных на удаление несвязанного аналита, добавляется «детектирующее» биотинилированное идентифицирующее АТ для создания сэндвич-комплекса «иммобилизированное АТ-аналит-детектирующее АТ». Окончательно комплекс формируется после добавления конъюгата стрептавидина и фикоэритрина, который служит флуоресцентным индикатором. Сбор данных, полученных в результате реакций, производится системой мультиплексного анализа Bio-Plex 200 (Bio-Rad). После проведения иммуноферментной реакции, суспензия помещается в анализатор, подается в проточную ячейку, где окрашивается двумя лазерами. Красный (635 нм) лазер освещает флуоресцентные красители, которыми отмечена каждая микросфера, классифицирует микросферы и производит идентификацию пробы.
В то же время зеленый ( 532 нм) лазер возбуждает молекулы фикоэритрина (PE), эмиссионное излучение которого детектируется фотоэлектронным умножителем. Цифровой процессор Bio-Plex 200 обрабатывает полученные данные, однозначно определяя количество каждого детектируемого типа микросфер. Концентрация аналита, связанного с микросферой, пропорциональна средней интенсивности флуоресценции фикоэритрина на соответствующей микросфере.
С помощью стандартных калибровочных разведений концентрация исследуемых 12 цитокинов в тестируемых образцах сыворотки высчитывается автоматически на персональном компьютере с использованием программы «Bio-Plex Manager»
Статистическая обработка данных
Для оценки полученных данных, их сравнения и выявления статистически значимых различий между группами были использованы электронные таблицы Excel 2003 и пакет прикладных программ SPPS 19.0.
Полученные данные представлены в виде медианы (Me) и интерквартильного размаха (P25-P75).
Чтобы оценить, есть ли значимые различия между значениями полученных данных у мужчин и женщин, использовался U критерия Манна-Уитни p<0,05.
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Анализ биохимических показателей
Таблица 1
| Показатель | Референтные значения | Контрольная группа | Пациенты с ожирением и ХРК | Пациенты с ХРК | Уровень значимости |
| Билирубин общий,ммоль/л Ме (Р25-Р75) | 2,7-21,0 | 11,5 (8,5-15,2) | 19,0 (13,5-19,5)* | 14,6 (11,3-18,1) | p<0,05 |
| Глюкоза, ммоль/л Ме (Р25-Р75) | 3,5-6,1 | 4,8 (4,5-5,0) | 5,0 (4,7-6,9) | 5,0 (4,8-5,2) | p>0,05 |
| АСТ, Ед/л Ме (Р25-Р75) | Жен:<31 Муж:<40 | 16,0 (13,0-22,0) | 25,0 (21-34)* | 16,0 (14,0-24,0) | р<0,05 |
| АЛТ, Ед/л Ме (Р25-Р75) | Жен:<31 Муж:<38 | 19,0 (15,0-29,0) | 21,0 (20,0-26,0) | 15,0 (11,0-18,0) | p>0,05 |
| СРБ, мг/л Ме (Р25-Р75) | 0-5 | 1,3 (0,3-2,0) | 2,5 (0,2-7,8) | 1,6 (0,8-2,0) | p>0,05 |
Проанализировав результаты из табл. 1, видно, что такие показатели как: глюкоза, АЛТ, СРБ находятся в пределах референтных значений. Показатели АСТ и общий билирубин в группе пациентов с ожирением и ХРК повышены. Статистически значимых отличий обнаружены (p<0,05). Это дает нам возможность думать, что на фоне приема антигистаминных препаратов уровень данных показателей может отличаться.
Анализ цитокинового профиля
Таблица 2
| Показатель | Контрольная группа | Пациенты с ожирением и ХРК | Пациенты с ХРК | Уровень значимости |
| IL 12, пг/мл Ме (Q25;Q75) | 0,00 (0,00-1,40) | 0,00 (0,00-0,00) | 0,00 (0,00-114,00) | р>0,05 |
| IL19, пг/мл Ме (Q25;Q75) | 8,04 (0,00-14,65) | 0,00 (0,00-8,04) | 9,52 (6,03-69,26) | р>0,05 |
| 20, пг/мл Ме (Q25;Q75) | 1,13 (0,00 -2,12) | 1,13 (0,00-1,13) | 1,13 (0,00-11,3) | р>0,05 |
| IL 27, пг/мл Ме (Q25;Q75) | 0,00 (0,00-0,00) | 0,00 (0,00-0,00) | 5,25 (0,00-72,26) | р>0,05 |
| IL 28, пг/мл Ме (Q25;Q75) | 0,00 (0,00-0,78) | 0,00 (0,00-0,00) | 3,45 (0,00-57,11) | р>0,05 |
| IL 29, пг/мл Ме (Q25;Q75) | 2,21 (0,00-10,50) | 4,42 (1,27-10,50) | 10,50 (4,42-159,45) | р>0,05 |
| IL 35, пг/мл Ме (Q25;Q75) | 0,00 (0,00-0,00) | 0,00 (0,00-0,00) | 35,40 (0,00-371,46) | р>0,05 |
Полученные результаты исследования цитокинового профиля, позволяют выявить тенденцию к повышению уровня провоспалительных цитокинов (IL-27, 28, 29), а также повышения уровня противовоспалительных цитокинов (IL-19,20,35) у пациентов с крапивницей. А в группе пациентов с ХРК и ожирением, наблюдает повышение провоспалительного цитокина IL-29. Статистически значимых отличий не обнаружено (p>0,05).
ВЫВОДЫ
1. В группе пациентов с ожирением и ХРК, а также в группе с ХРК и нормальной массой тела статистически значимые различия по биохимическим показателям были выявлены (р<0,05)
2. В группе пациентов с ожирением и ХРК, а также в группе пациентов с ХРК и нормальной массой тела выявлена тенденция к дисбалансу следующих цитокинов IL-19, IL-27, IL-28, IL-29, IL-35.
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1. Аллергология и иммунология: национальное руководство / под ред. Р.М.Хаитова, Н.И. Ильиной. – М.: ГЭОТАР- Медиа, 2009 – 656с.
2. Гиперчувствительность к пищевым антигенам как предиктор развития метаболического синдрома / П.С. Новиков, Н.А. Черевко, С.Э. Кондаков и др. // Цитокины и воспаление. – 2016. Т. 15, № 3-4. – С. 280-284.
3. Диагностика пищевой гиперчувствительности, опосредованной иммунопатологическими реакциями III типа / А.З. Розенштейн, М.Ю. Розенштейн, С.Э. Кондаков, Н.А. Черевко // Российский иммунологический журнал. – 2015. Т. 9 (18), № 2. – С. 150-153.
4. Данилычева И.В. // Мед. вестик. – 2007. - №40. – С.425
5. Дякина Н.Ю., Гущин И.С. Неаллергические средовые факторы предрасположенности к аллергии // Аллергия, астма и клиническая иммунология. – 2001. -№3. -С.3-7
6. Климов В.В. и соавт. Клиническая иммунология и аллергология. – Т.: Издво «Печатная мануфактура», 2008. – 212 с
7. Клиническая иммунология и аллергология/ Под ред. Г.Лолора-мл., Т.Фишера, Д.Адельмана. Пер. с англ. - М.: Изд-во "Практика", 2000. - 806 с.
8. Крапивница и ангиоотек: рекомендации для практических врачей / под ред. И.С. Гущина, И.Н. Ильиной. – М.: ФармусПринт Медиа, 2007. – 128с.
9. Ожирение: учебное пособие / А.Ю. Барановский, Воробихина Н.В. – Санкт Петербург, - 2007. – 20-40 с.
10. Пищевая непереносимость: учеб. пособие / А.Ю. Барановский, Л.И. Назаренко, К.Л. Райхелъсон – Санкт-Петербург, – 2006. – 6-115 с.
11. Сибгатуллина Н.А. Клинико- иммуннологические особенности хронической рецидивирующей крапивницы и методы ее диагностики: автореф. дис.... канд.мед.наук. – М., 2003. – 27с.
12. Система цитокинов: Теоретические и клинические аспекты/ Под ред. В.А.Козлова, С.В. Сенникова. – Новосибирск: «Наука», 2004. – 324 с.
13. Хаитов Р.М., Игнатьева Г.А., Сидорович И.Г. Иммунология. Норма и патология - М.: Изд-во "Медицина", 2010. - 752 с.
14. Феденко Е.С. // Клинич. иммунология. – 2004. - №8. – С.24-26
15. Частная аллергология / под редакцией Г.Б. Федосеева. – Спб.:Нормед-Издат, 2001. – 464 с.
16. Ferrer M., Luquin E., Sanchez-Ibarrola A. et al. // Int. Arch. Allergy Immunol. – 2002. – Vol.129, N3. – P.254-260
17. Grattan C., Sabroe R., Graves M. Chronic urticaria
