Идентификация видов и внутривидовая дифференциация

 

Идентификация видов и внутривидовая дифференциация энтеробактерий составляет заключительный этап бактериологического исследования различных материалов. В большинстве случаев идентификация видов энтеробактерий предусматривает применение дополнительных к использованным на предыдущем этапе (определения рода) биохимических тестов из минимального дифференцирующего ряда.

Для патогенных, а также для некоторых условно патогенных энтеробактерий, идентификация включает, кроме биохимической, и серологическую характеристику. Последняя обеспечивает тонкую дифференциацию энтеробактерий вплоть до определения серовидов и подсеровидов (например, для Shigella flexneri).

Другие возможности внутривидовой дифференциации, основывающиеся на особенностях взаимодействия с препаратами бактериофагов, на феномене колициногении или определении биоваров реализуются при наличии соответствующих эпидемиологических показаний и изложены в следующем разделе "Методических указаний".

Род Shigella в соответствии с действующей в СССР Международной классификацией разделен на 4 подгруппы (A, B, C, D), соответствующие видам: S. dysenteriae, S. flexneri, S. boydii, S. sonnei (табл. 10).

 

Таблица 10. Классификация бактерий рода Shigella*

 

Подгруппа	Вид	Серовар	Подсеровар	Сокращенная антигенная формула
А.	S. dysenteriae	1-12
В.	S. flexneri	1	1a	I:4_
			1b	I:6...
		2	2a	II:3, 4...
			2b	II:7, 8...
		3	3a	III:(3, 4), 6, 7, 8_
			3b	III:(3, 4), 6_
		4**	4a	IV:3, 4_
			4b	IV:6_
		5	5a	V:3, 4_
			5b	V:7, 8_
		6	-	VI:-_
		Х-variant	-	-:7, 8_
		Y-variant	-	-:3, 4_
C.	S. boydii	1-18	-
D.	S. sonnei	-	-

 

Примечание. * Приведена принятая в СССР Международная классификация шигелл с учетом внесенных в нее в 1982 г. Международным подкомитетом по энтеробактериям изменений и дополнений;

1) вид S. dysenteriae дополнен сероварами 11 и 12, ранее известными как провизорные (временные) серовары 3873-50 и 3341-55 соответственно;

2) серовар 3 S. flexneri включает ныне два подсеровара - 3a и 3b;

3) серовар 5 S. flexneri разделен на подсеровары 5a и 5b;

4) вид S. boydii дополнен сероварами 16, 17 и 18, ранее известными как провизорные серовары 2710-54, 3615-53 и Е10163 соответственно.

** С конца 70-х годов в СССР стали выделяться S. flexneri 4 с антигенной формулой (IV:7, 8), не предусмотренной Международной классификацией шигелл.

 

Основные тесты для дифференциации указанных видов представлены в табл. 11, а для их внутривидовой дифференциации в табл. 12-14.

 

Таблица 11. Дифференциация видов Shigella по биохимическим свойствам

 

Тест или субстрат	S. dysenteriae	S. flexneri		S. boydii	S. sonnei
		серовары 1-5	серовар 6
Маннит	-	+	+, -	+	+
Глюкоза (газ)	-	-	-, +	-**	-
Лактоза	-	-	-	-**	(+)
Индол	-, +	-, +	-	-, +	-
Глицерин	х	-	+, (+)	+, (+)	х
Орнитин	-	-	-	-**	+, (+)
Сорбит	х	х	х	х	-
Дульцит	-*	-	х	х	-
Ксилоза	х	-	х	х	х
Рафиноза	-	ГАРАНТ: #	-	-	х

 

Примечание.

* S. dysenteriae 5 ферментируют дульцит.

** S. boydii 6 и 14 могут образовывать газ, S. boydii 13 декарбоксилируют орнитин, S. boydii 9 могут замедленно ферментировать лактозу.

 

Таблица 12. Биохимические свойства сероваров S. dysenteriae

 

Серовар	Индол	Дульцит	Рамноза	Ксилоза	Сорбит	Арабиноза
1	-	-	-	-	-	-, +
2	+	-	+	-	х	-, +
3	-	-	-	-	+, (+)	+, (+)
4	-	-	-	-	-, (+)	-, +
5	-	+, (+)	-	-	+, (+)	+
6	-	-	-	-	+, (+)	-, +
7	+	-	-, (+)	-	-	+
8	+	-	-	+	-	+
9	-	-	-	-, (+)	-, +	+
10	-	-	-	+	+, (+)	+
11	-	-	-	(+)	(+)	+
12	-	-	-, +	(+)	(+)	+

 

Таблица 13. Биохимические свойства сероваров S. tlexneri

 

Серовар	Индол	Сорбит	Рамноза
1	-, +	-, +	-
2	-, +	-, +	-
3	+, -	х	х
4	+, -	х	х
5	+, -	х	-
X-variant	+, -	+, -	-, (+)
Y-variant	-, +	-, +	-, (+)

 

Таблица 14. Биохимические свойства сероваров S. boydii

 

Серовар	Индол	Дульцит	Ксилоза	Сорбит
1	-	-	(+), +	(+), +
2	-	-	-	-, (+)
3	-	х	х	+
4	-	-, (+)	-	х
5	+	-	(+)	+, (+)
6	-	(+)	+	+, (+)
7	+	-	+	+, (+)
8	-	-	х	+, (+)
9	+	-	-	+, (+)
10	-	х	х	х
11	+	-, (+)	+, (+)	х
12	-	-	-	х
13	+	-	-	+, (+)
14	-	-	(+), +	+, (+)
15	+	-	-	+, (+)
16	+	-	+	-
17	+	-	+	+, (+)
18	-	-	(+)	(+)

 

Серологическую идентификацию шигелл проводят с помощью адсорбированных сывороток. Исследование начинают с основной поливалентной сыворотки, содержащей антитела к S. flexneri 1-6 и S. sonnei. При положительном результате далее используют поливалентные сыворотки к S. flexneri 1-5, S. sonnei (I и II фаза) и сыворотку к S. flexneri 6 (с учетом этиологической структуры дизентерии в данной местности). Учитывают и данные о биохимических свойствах выделенной культуры шигелл: например, шигеллы, образующие индол, не следует агглютинировать в сыворотках к S. sonnei и к S. flexneri 6 (S. newcastle).

Установление антигенной формулы S. flexneri (см. табл. 10) начинают с применения сероварспецифических сывороток (к антигенам I, II, III, IV, V, VI), а затем групповых (3, 4; 6; 7, 8). Порядок исследования также зависит от пейзажа сероваров шигелл в регионе. При работе с культурами S. flexneri надо помнить, что иногда свежевыделенные штаммы слабо агглютинируются, особенно в сыворотке к групповым антигенам 3, 4. В таких случаях следует для повышения агглютинабельности провести 1-2 пассажа 4-часовой бульонной культуры с высевом на скошенный СПА. Если культура агглютинирует в сыворотке к S. sonnei, серологическая ее идентификация считается завершенной.

Бактерии, принадлежащие по культуральным и биохимическим свойствам к шигеллам, но не агглютинирующиеся в основной поливалентной сыворотке, испытывают с поливалентными сыворотками к другим видам шигелл: к S. dysenteriae (если они не сбраживают маннит) или к S. boydii (в случае маннитферментирующих штаммов). При положительной реакции в одной из примененных сывороток культуру испытывают с сероварспецифическими сыворотками, входящими в данную поливалентную смесь.

Некоторые шигеллы (S. dysenteriae, S. flexneri 6, S. boydii) могут иметь хорошо развитые K-антигены, вследствие чего живые культуры не агглютинируются в соответствующих сыворотках. Взвеси таких культур в ИХН следует прогреть в водяной бане при 100°C в течение 1 часа. При этом обязателен контроль культуры до кипячения на спонтанную агглютинацию в капле ИХН, для ее исключения.

В случаях каких-либо затруднений при серологической идентификации шигелл необходимо провести рассев штамма в чашке с дифференциальной средой (ЭМС или Эндо) с целью проверки чистоты культуры и повторно провести биохимическую идентификацию.

Род Salmonella согласно Определителю Берги (1980) состоит из четырех подродов (см. табл. 1), дифференциацию которых проводят с использованием биохимических тестов, приведенных в табл. 15.