Реакция агглютинации (РА)

Сущность реакции агглютинации заключается в склеивании антигена антителами в присутствии электролитов, с выпадением образовавшегося комплекса в осадок. Реакцию агглютинации ставят с целью:

● обнаружения антител в сыворотке крови обследуемых, используя заведомо известный антиген, положительно реагирующих считают больными;

● определения вида, сероварианта возбудителя, используя заведомо известную сыворотку.

Реакцию агглютинации ставят двумя способами:

● по типу пробирочной в пробирках Флоринского;

● по типу капельной на предметном стекле или пластине.

При постановке пробирочной реакции вначале в ряд пробирок наливают физиологический раствор, затем готовят разведения сыворотки, потом вносят антиген.

Учет реакции проводят через 18 – 20 часов выдерживания в термостате при 37⁰ С, а затем час при комнатной температуре. Интенсивность агглютинации оценивают в крестах:

▪ четыре креста – (#) соответствует 100%-ной агглютинации, выпадает осадок в виде зонтика, надосадочная жидкость прозрачная;

▪ три креста – (+++) – 80%-ная агглютинация, осадок зонтик, надосадочная жидкость слегка мутная;

▪ два креста – (++) – 50%-ная агглютинация, осадок диск, надосадочная жидкость мутная;

▪ отрицательная реакция (-) характеризуется равномерным помутнением.

Контролем реакции агглютинации в пробирках являются отрицательные результаты взаимодействия: ▪ антигена с нормальной сывороткой кролика; ▪ антигена и физиологического раствора.

Капельную реакцию агглютинации ставят на предметном стекле или пластине, смешивая каплю сыворотки и каплю антигена. В положительных случаях, если антиген подходит антителу образуются хлопья:

▪ четыре креста – (#) – крупные хлопья и прозрачная жидкость;

▪ два креста – (++) – мелкие хлопья и мутная жидкость.

▪ отрицательная – (-) – равномерная взвесь.

Учитывают капельную РА спустя 5-8 мин после постановки.

Методика постановки реакции агглютинации для диагностики бруцеллеза

При исследовании сыворотки крупного рогатого скота в пять пробирок разливают 0,5%-ный фенолизированный раствор натрия хлорида: в первую - 2,4 мл раствора, в последующие – 0,5 мл, затем в первую пробирку вносят 0,1 мл исследуемой сыворотки.

При исследовании сыворотки от мелкого рогатого скота используют фенолизированный 5%-ный раствор хлорида натрия. В первую пробирку вносят 0,2 мл сыворотки и 2,3мл раствора, в последующие пробирки разливают также по 0,5 мл хлорида натрия.

Готовят разведения: из первой 0,5 мл переносят во вторую пробирку, смешивают и так далее, из последней 0,5 мл выливают. Затем в каждую пробирку вносят, начиная со второй, по 0,5 единого бруцеллезного антигена.

После добавления антигена разведение сыворотки в каждой пробирке удваивается разведения сыворотки крупного рогатого скота будут составлять 1:50, 1:100, 1:200, 1:400, а в сыворотке мелкого рогатого скота: 1:25, 1:50, 1:100, 1:200. Ставят контрольные реакции:

▪ с нормальной или негативной сывороткой кролика в испытуемых разведениях;

▪ с позитивной бруцеллезной сывороткой в разведениях до предельного титра.

После добавления компонентов пробирки встряхивают, помещают в термостат при 37 – 38⁰ С на 16-20 часов, затем час выдерживают при комнатной температуре и проводят учет.

Реакцию считают положительной при наличии агглютинации с сыворотками крупного рогатого скота в разведении 1:200, овец и коз в разведении 1:100.

Реакцию считают сомнительной при наличии агглютинации только в разведении у крупных животных 1:50, овец и коз – 1:25, сыворотки таких животных подлежат повторному исследованию через 3 – 4 недели. Обследуемых, у которых дважды получены сомнительные результаты относят к положительно реагирующим.