Методика постановки и учета Роз-бенгаловой пробы (РБП)

Капельную РА применяют для выявления бруцеллезных Ig в сыворотке крови крупного и мелкого рогатого скота.

Исследуемую сыворотку в объеме 0,3 мл вносят на дно пластины, добавляют 0,03 мл роз-бенгал-антигена, тщательно перемешивают покачиванием в течение 4 мин.

Одновременно ставят контроли с позитивной, негативной сыворотками и физраствором. Учитывают в крестах:

▪ четыре креста – (#) - крупные хлопья и прозрачная жидкость;

▪ два креста – (++) – мелкие хлопья и мутная жидкость;

▪ отрицательная – (-) – равномерная взвесь.

Современные разновидности РА

Существует несколько разновидностей реакции агглютинации.

● Кольцевая реакция с молоком КРА, ставят в пробирках Флоринского, когда к 2 мл молока добавляют 0,2 мл антигена для КРА, смешивают, выдерживают в термостате 37⁰ С 45-60 мин, учитываю результат. При наличии в молоке бруцеллезных Ig образуется комплекс, сорбирующийся на каплях жира с образованием синего кольца в слое сливок – положительный результат, отрицательная реакция характеризуется синим окрашиванием пробы с желтоватым слоем сливок.

● Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА) сущность которой заключается в склеивании эритроцитарного антигена под действием антител и образования осадка в виде зонтика Ставят РНГА по типу луночной, в лунках плексигласовых панелей или микрометодом в планшетах или по типу капельной на предметном стекле.

Учитывают луночную РНГА в крестах спустя 45 – 60 мин выдерживания при комнатной температуре:

▪ четыре креста – (#) соответствует 100%-ной агглютинации, выпадает осадок в виде зонтика с кружевными краями;

▪ три креста – (+++) – 80%-ная агглютинация, осадок зонтик с округлыми краями;

▪ два креста – (++) – 50%-ная агглютинация, осадок диск и пунктик;

▪ отрицательная – осадок пунктик.

Капельную РНГА применяют для выявления носителей сальмонелл среди ремонтного молодняка и родительского стада кур, учитывают через 3 – 5 мин:

▪ четыре креста – (#), когда крупные, коричневые хлопья; 

▪ два креста – (++) – мелкие хлопья.

▪ отрицательная – нет хлопьев.

● Реакция торможения гемагглютинации (РТГА), син. реакция задержки гемагглютинации (РЗГА) ставят по типу луночной в лунках плексиглассовых панелей или микрометодом в планшетах, широко применяют для выявления гемагглютинирующих вирусов и антител против гемагглютинирующих вирусов. Учитывают в крестах:

▪ четыре креста – (#) соответствует 100%-ной задержки гемгглютинации, выпадает осадок из эритроцитов в виде пунктика или узкого колечка;

▪ два креста – (++) – 50%-ная задержка гемгглютинация, осадок диск и пунктик;

▪ отрицательная – (-) – осадок из эритроцитов в виде зонтика.

● Реакция Кумбса (РК) позволяет выявить неполные антитела. Метод основан на применении антиглобулиновой сыворотки, служащей посредником для соединения неполных антител, фиксированных на эритроцитах барана. Применяют РК для диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота в бактериальном варианте.

В медицине используют для выявления неполных антител и диагностики резус – конфликта, аутоиммунных заболеваний (красная волчанка, ревматоидный полиартрит и др.).