Техника долговременного хранения спермы

Хранение спермы в жидком азоте (-196°С) является в настоящее время наиболее совершенным методом долговременного сбережения оплодотворяющей способности спермиев.

Для хранения спермы в жидком азоте необходимо иметь сложное оборудование, которое выпускает отечественная промышленность.

На племпредприятиях замороженную сперму хранят в стационарных хранилищах типа ХСЖАили КВ-6202. Хранилище вмещает 500-680 л жидкого азота и рассчитано на 25 тыс. ампул или 500 тыс. гранул спермы.

На пунктах искусственного осеменения используют специальные двухстенные сосуды Дьюара, изготовленные из нержавеющей стали и алюминия, с вакуумно-порошковой или многослойно-вакуумной теплоизоляцией. Чаще всего применяют для хранения замороженной спермы сосуды следующих типов: «Харьков-30» вместимостью 30 л, «Харьков-15» -48 л, СД-20 -20 л, АТ-4 -42 л, АТ-6 -33 л.

Рис. 54. Сосуды Дьюара.165

Поскольку жидкий азот непрерывно испаряется, необходимо периодически пополнять сосуды каждые 3-4 нед. Чтобы температура спермы во время хранения не повышалась, в сосуде любого типа должно оставаться перед доливкой не менее 30-40% жидкого азота (от полной вместимости). Племпредприятия снабжаются жидким азотом со специальных заводов. На племпредприятиях стационарное хранилище должно иметь план размещения спермы разных производителей, чтобы можно было быстро найти нужный сосуд.

Что дает замораживание спермы?

Замораживание спермы и длительное хранение спермы дает:

1. Возможность рационально использовать производителей, получать от них сперму регулярно на протяжении года, широко применять сперму ценнейших, проверенных по качеству потомства производителей, и тем самым резко ускорять улучшение породных и продуктивных качеств сельскохозяйственных животных.

2. Появилась возможность создавать «генетические банки» -хранилища замороженной спермы, накапливать в них миллионы доз, перевозить сперму на любые расстояния. Всвязи с этим открываются неограниченные возможности для обмена спермой как внутри страны, так и со многими зарубежными странами.

3. Селекционная работа приобретает новое качественное значение -она становится крупномасштабной. Крупномасштабная селекция в настоящее время является господствующим методом в животноводстве.

Рис. 55. Замораживание спермы.166

4. Замораживание спермы дает немалые экономические выгоды:

а) снижаются транспортные расходы на перевозку спермы;

б) сокращается число мелких племпредприятий, вместо которых появляются крупные, хорошо оснащенные племпредприятия, способные обслужит громадное поголовье;

в) Внедряются прогрессивные формы обслуживания ферм.

Долговременное хранение спермы включает замораживание спермы быка:

а) в виде гранул;

б) в облицованных гранулах;

в) в соломинках (пайеттах).

Замораживание спермы быка в виде гранул

Перед получением спермы необходимо подготовить холодильник или термос со льдом для ее предварительного охлаждения и сосуды с жидким азотом, простерилизовать посуду и оборудование, а также помещение (бактерицидными лампами), где будет проводиться замораживание.

Затем готовят разбавитель следующего состава:

Вода дистиллированная 100 мл

Лактоза 11,5 г

Желток куриного яйца 20 мл

Глицерин 5 мл

Стрептоцид 0,1-0,2 г

Пенициллин 75-95 тыс. ЕД

Стрептомицин 75-95 тыс. ЕД

Оценив полученную от производителя сперму по густоте, активности и концентрации спермиев, ее разбавляют с таким расчетом, чтобы в дозе разбавленной спермы (т.е. в одной грануле) после ее замораживания и оттаивания должно содержаться не менее 20-25 млн. активных спермиев. При расчетах нужно иметь в виду, что около 50% спермиев могут погибать в процессе замораживания и оттаивания.

Среду, содержащую глицерин, нужно приливать в сосуд со спермой постепенно, добавляя небольшие порции среды (заранее отмеренной) по стенке флакона и осторожно перемешивая покачиванием флакона. Постепенное разбавление продолжается 2-5 мин. При быстром разбавлении глицерин вызывает деформацию спермиев.

Закрытые пробками флаконы с разбавленной спермой охлаж 167

дают до 2-4°Ссо скоростью не более одного градуса в минуту. Для этого флаконы ставят не прямо на лед, а кладут поверх льда слой ваты толщиной 1-2 см, с при охлаждении в холодильнике помещают флаконы в плоскую ванночку с водой, имеющей температуру 30°С.

Сперму выдерживают (адаптируют) при температуре 2-4°Св течение 4-6 ч, после чего замораживают в охлажденном состоянии, не допуская нагревания. Замораживают сперму в виде гранул на фторопластовой пластине.

Замораживание спермы в виде гранул на фторопластовой пластине

Пластина во время замораживания должна иметь температуру от -80 до -110°С, в зависимости от объема гранулы. Измеряют температуру пластины при помощи электрического термометра (термопары). Для охлаждения пластину выдерживают в парах жидкого азота, пластину подвешивают внутри сосуда на расстоянии 6 см от поверхности жидкого азота.

Пластмассовый шприц с присоединенной к нему иглой для взятия крови заранее стерилизуют и охлаждают в холодильнике до 2-4°С. после охлаждения фторопластовой пластины, в парах жидкого азота набирают в холодный шприц (стараясь не нагревать его) охлажденную сперму, прошедшую процесс адаптации, быстро наливают по 2-10 капель в каждую лунку на поверхности пластины, где она замерзает в виде маленьких шариков (гранул). Водной грануле при этом содержится от 0,1 до 0,5 мл спермы. Гранулы выдерживают на пластине в течение 5-6 мин, затем погружают пластину с гранулами на 5-10 с в жидкий азот. По истечении указанного срока пластину извлекают из жидкого азота, наклоняют под углом 45° и счищают гранулы, охлажденной в жидком азоте лопаточкой из органического стекла в кювету или кружку с жидким азотом. Заморозив эякулят одного быка, ссыпают гранулы из кюветы или кружки в пластмассовые стаканчики, охлажденные до температуры жидкого азота. Прикрепив бирку с кличкой быка и датой замораживания спермы, стаканчики опускают в стационарное хранилище или в сосуд Дьюара.