Анализ продуктов

Практически в любом биохимическом исследовании очень важно уметь обнаруживать и точно определять ничтожные количества специфических соединений. Чаще всего для этого используют особые индикаторы, которые при взаимодействии со специфическими соединениями определенным образом окрашиваются. Например, для выявления на хроматограмме аминокислот или пептидов хроматограмму опрыскивают нингидрином. Если выявляемый белок находится в растворе, то по интенсивности окрашивания биуретовой реакции можно определить его количество. Фенолы и концентрированная серная кислота окрашивает сахара и в растворе и на хроматограмме в красный цвет. Восстанавливающие сахара выявляют по реакции с раствором нитрата серебра.

Нуклеотиды определяют количественно по их спектрам поглощения. Еще более чувствительным методом является флуоресцентный анализ. Один из новых реагентов, флуорескамин, взаимодействует с любым первичным амином, образуя интенсивно флуоресцирующие продукты.

флуорескамин флуоресцирующее соединение

Чрезвычайно чувствительны методы обнаружения летучих соединений с помощью газовой хроматографии. Применяя пламенные ионизационные детекторы, можно определить содержание практически любого соединения в количестве, не превышающем несколько пикомолей.

Весьма ценной разновидностью обычной тонкослойной или бумажной хроматографии является диагональная хроматография. Сначала нанесенный материал хроматографируют в одном направлении, затем в тонком слое на пластинке или бумаге проводят определенную химическую реакцию, после чего осуществляют разделение в другом направлении. Немодифицированные соединения располагаются по диагонали пластинки, тогда как продукты реакции оказываются смещенными по отношению к ней.