Студопедия
МОТОСАФАРИ и МОТОТУРЫ АФРИКА !!!


Авиадвигателестроения Административное право Административное право Беларусии Алгебра Архитектура Безопасность жизнедеятельности Введение в профессию «психолог» Введение в экономику культуры Высшая математика Геология Геоморфология Гидрология и гидрометрии Гидросистемы и гидромашины История Украины Культурология Культурология Логика Маркетинг Машиностроение Медицинская психология Менеджмент Металлы и сварка Методы и средства измерений электрических величин Мировая экономика Начертательная геометрия Основы экономической теории Охрана труда Пожарная тактика Процессы и структуры мышления Профессиональная психология Психология Психология менеджмента Современные фундаментальные и прикладные исследования в приборостроении Социальная психология Социально-философская проблематика Социология Статистика Теоретические основы информатики Теория автоматического регулирования Теория вероятности Транспортное право Туроператор Уголовное право Уголовный процесс Управление современным производством Физика Физические явления Философия Холодильные установки Экология Экономика История экономики Основы экономики Экономика предприятия Экономическая история Экономическая теория Экономический анализ Развитие экономики ЕС Чрезвычайные ситуации ВКонтакте Одноклассники Мой Мир Фейсбук LiveJournal Instagram

Определение молекулярной массы




Наиболее надежные результаты определения молекулярной массы дает ультрацентрифугирование. Основы метода заключаются в следующем. Частицы в растворе осаждаются (седиментация), когда их плотность выше плотности раствора, или всплывают (флотация), когда их плотность ниже плотности раствора. Чем больше разница в плотности, тем быстрее идет распределение частиц. Когда плотности частиц и раствора одинаковые (изопикнические условия), частицы остаются неподвижными. При малой разнице в плотности частицы можно разделить только в центрифуге, которая создает центробежную силу, во много раз превышающую силу земного притяжения.

Величины ускорения до 10 000 g получают с помощью простой настольной центрифуги, высокоскоростные центрифуги с охлаждением позволяют достигнуть 50 000 g, а ультрацентрифуги, работающие с охлаждением и в вакууме, – 500 000 g. Существуют два типа роторов – угловые и свободно подвешенные (бакет-роторы). Последние используются обычно в высокоскоростных центрифугах и ультрацентрифугах..

Скорость седементации частицы зависит от угловой скорости, эффективного радиуса ротора и седиментационных свойств частицы. Седиментационные свойства частицы характеризуются коэффициентом седиментации S и выражаются в единицах Сведберга, коэффициент седиментации может колебаться в широких пределах (от 5 для рРНК до 107 для клеточных ядер).

g=ω2r v= ω2rS S=M(1-ūρ)/f,

где g – ускорение свободного падения (9,81 м/с2),

v – скорость седиментации, см/с,

ω – угловая скорость, рад/с,

S – коэффициент седиментации (1S=10-13 с),

М – молекулярная масса,

ū – парциальный объем частицы, см3/г,

ρ – плотность раствора, г/см3,

f – коэффициент трения.

Наиболее часто ультрацентрифугированием определяют молекулярную массу белка. Исследуемый раствор белка помещают в небольшую прозрачную ячейку, которую вставляют в специальное гнездо ротора. Молекулы белка в этой ячейке под действием центробежной силы, развиваемой при вращении ротора, постепенно оседают на дно. Фотоприставка к ультрацентрифуге позволяет делать снимки содержимого ячейки через определенные промежутки времени и определять скорость оседания частиц. Определение молекулярной массы ведут двумя способами – по скорости седиментации белков и по седиментационному равновесию.

В первом случае измеряют скорость перемещения в ячейке ультрацентрифуги границы растворитель-белок, относя ее к величине развиваемого центробежного ускорения, то есть находят константу седиментации S=v/ω2r. Молекулярную массу белка рассчитывают по формуле M=RTS/D(1-ρ/σ), гдеR – газовая постоянная, T – температура, D – коэффициент диффузии, ρ – плотность растворителя, σ – плотность белковых частиц. Во втором случае измеряют концентрацию белка с1 и с2 в двух точках ячейки на расстоянии х1 и х2 от центра ротора в тот момент, когда после определенного срока работы ультрацентрифуги я ячейке установится седиментационное равновесие. Расчет ведут по формуле




M=2RT ln(c2/c1)/(1-ρ/σ)ω2(x22-x12).

При изопикническом центрифугированиипробу (ДНК, РНК или вирусы) равномерно распределяют во всем объеме раствора CsCl. Градиент плотности создается в процессе центрифугирования за счет седиментации и диффузии. Со временем каждая частица попадает в область, соответствующую ее собственной плавучей плотности. Центрифугирование прекращают, когда устанавливается равновесие. При использовании коротких кювет седиментационное равновесие достигается за несколько часов.

Кроме ультрацентрифугирования молекулярный вес белков определяют простой гель-фильтрацией. Определяют объем элюента, необходимого для выноса белка из колонки с гелем сефадекса Ve, и соотнесении его со свободным объемом колонки Vo. Пользуясь калибровочным графиком, построенным по Ve/Vo с использованием маркерного белка, находят молекулярную массу исследуемого белка.





Дата добавления: 2014-02-04; просмотров: 1377; Опубликованный материал нарушает авторские права? | Защита персональных данных | ЗАКАЗАТЬ РАБОТУ


Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

Лучшие изречения: На стипендию можно купить что-нибудь, но не больше... 9204 - | 7335 - или читать все...

Читайте также:

 

18.207.240.35 © studopedia.ru Не является автором материалов, которые размещены. Но предоставляет возможность бесплатного использования. Есть нарушение авторского права? Напишите нам | Обратная связь.


Генерация страницы за: 0.002 сек.