Биопроба. Таблица 73 - Критерии дифференциации биоваров P

Таблица 73 - Критерии дифференциации биоваров P. haemolytica

Таблица 72 - Критерии дифференциации подвидов P. multocida

Таблица 71 - Основные дифференцирующие признаки видов рода Pasteurella

Идентификация пастерелл на уровне вида

Pasteurellaceae и рода Yersinia

Таблица 70 - Дифференцирующие признаки родов семейства

Признаки Роды
  Actinobacillus Haemophilus Pasteurella Yersinia
Вязкость колонии + - - -
Подвижность при 22° С - - - Р
Каталаза Р Р + +
Оксидаза Р Р Р -
Фосфатаза + + 1) + -
Рост на агаре Мак-Конки + - Р +
Тест метилрот (37°С) - Р - +
Тест Фогес-Проскауера Р н.д. -  
Рост на среде с 0,5% NaCI - - - +
Ферментация с образованием кислоты: Глюкозы   +   +   +   +
Фруктозы + Р + +
Ксилозы + Р Р Р
Дульцита - - -2) -
Инозита - -3) Р Р
Инулина - -4) - -
Гидролиз твина - 80 - - - Р
Г + Д в ДНК, моль% 40-43 38-44 40-45 46-50

1) Исключение — Н. haemoglobinophilus; P — признак различен в

2) Исключение — P. multocida и P. haemolytica; таксонах рангов (виды рода,

3) Исключение — Н. aprophilus и Н. parasuis; роды семейства); нд — нет данных

4) Исключение — Н. parasuis

Для видовой дифференциации пастерелл рекомендуется исследовать у куль­туры способность к росту на агаре Мак-Конки, образовывать бета-гемолизин, орнитин-декарбоксилазу, уреазу, индол, кислоту из глюкозы, лактозы, саха­розы, мальтозы, маннита. Биохимическую идентификацию можно проводить при помощи тест-системы API20 NE (Bio Mericx) и др.

Вид пастерелл Признаки
Гемолиз   Рост на агаре Мак-Конки Индол Уреаза Орнитин декарбоксилаза Кислота (24-48 ч.)
Глюкоза Лактоза Сахароза Мальтоза Маннит
P. multocida - - + - (+) + (-) + (-) (+)
P. haemolytica + (+) - - (-) + (+) + + +
P. pneumotropica - (-) (+) + + + (+) + + -
P. canis - - + /- - + + н.д. н.д. - -
P. dagmatis - - + + - + * - - + -
P. caballi - - - - + /- + * + Н.Д. (+) +
P.aerogenes - + - + (+) + * (-) + + -
P. gallinamm - (-) - - + /- + - + + -

(+) — преимущественно положительный результат; (-) — преимуществен­но негативный
результат; + * — газ и кислота из глюкозы; нд — нет ден­ных; 1)- P. avium требует для роста на питательных средах НАД.

После установления видовой принадлежности пастерелл, если выделе­ны культуры P. multocida и P. haemolytica, можно установить подвид P. muitocida или биовар P. haemolytica, что позволяет, ис­пользуя эти признаки в качестве маркера возбудителя, более детально про­водить анализ эпизоотической ситуации.

Идентификация серовариантов P. multocida

Определение сероваров возбудителя является обоснованием для исполь­зования вакцин, включающих конкретный серовар P. multocida. Серотипирование основано на антигенных различиях капсульного вещества (полиса­харид), в соответствии с чем P. multocida подразделяют в РНГА на 5 серова­ров (А, В, D, Е и F). По особенностям соматического антигена P. multocida также дифференцируют на серовары, которые обозначают цифрами.

В практических условиях дифференциация сероваров возбудителя в РНГА, из-за отсутствия коммерческих реагентов, пока недоступна, и по­этому прибегают к несерологическим методам, основанным на иных осо­бенностях клеток пастерелл.

Поскольку серовар Е встречается в Африке, а серовар F выделен у ин­деек, то реально речь идет об установлении сероваров А, В и D. С этой исследуемую культуру пастерелл засевают на агар Хоттингера в шинках Петри с таким расчетом, чтобы был получен достаточно густой шсг изолированных колоний.

Одновременно, вслед за этим посевом по диаметру чашки одной пря­ной линией высевают бактериологической петлей бульонную культуру из штамма S. aureus, способного продуцировать фермент гиалуронидазу, и обычно сопряжено с хорошо выраженной гемолитической активностыо.

Подвид     Ферментация    
Трегалоза Д-Ксилоза а -Арабиноза Сорбит Дульцит
P. multocida subsp. multocida V V - + -
Р. multocida subsp. seplica + + - - -
P. multocida subsp. gallicida - + V + +

V — варьирующий признак.

Посевы инкубируют при 37° С в течение 18-24 часов и просматри­вают в косопроходящем пучке света в стереоскопическом микроскопе МБС-1.

Колонии P. multocida серовара А, из-за расщепления гиалуронидазой стафилококка гиалуроновой кислоты в капсуле пастерелл, в отличие от колоний от сероваров В и D, тусклые, имеют серый или голубой цвет и не флуо­ресцируют.

Если испытуемая культура не относится к серовару А, то ее исследу­ют в трипафлавиновой пробе, которая, в принципе, предназначена для выявления у бактерий признаков диссоциации. Испытуемую культуру выращивают 24 часа при 37° С в 3-5 мл бульона Хоттингера, центри­фугируют, осадок удаляют, седимент ресуспендируют в оставшейся жидкости и добавляют в пробирку 0,5 мл свежеприготовленного раство­ра трипафлавина (акрифлавин) 1:1000. Компоненты перемешивают и выдерживают 10-20 минут при комнатной температуре. Если взвесь бактерий стабильна, культуру относят к серовару В, выпала в осадок — к серовару D.

Признаки Биовары
  А Т
Образование кислоты из: Арабинозы   + -
Ксилозы + -
Трегалозы - +
Салицина - +
Чувствительность к пенициллину Высокая Слабая
сероварианты 1, 2, 5, 6, 7, 8, 9, 11, 12 3, 4, 10
Локализация в организме естественных хозяев Носоглотка Миндалины
Ассоциация с патологией Пневмонии крупного рогатого скота и овец, септицемия новорожденных ягнят Септицемия новорожденных ягнят

Проводят с целью выделения культуры возбудителя из исследуемого ма­териала и определения патогенности выделенной культуры возбудителя. С целью выделения пастерелл из исследуемого материала готовят суспен­зию (1:10) и вводят подкожно в объеме 0,2 мл белым мышам. Приданном способе заражения удается определить наличие вирулентных штаммов Р. multocida. За животными наблюдают в течение недели. Для проверки па­тогенных свойств выделенных культур P. multocida суточной бульонной культурой заражают в дозе 0,2 мл подкожно белых мышей массой 16-18 г. Вирулентные штаммы (обычно серовар В) вызывают гибель живот­ных в течение 24-72 часов, культуры сероваров А и D — в пределах семи суток. Патогенность культур, выделенных от птицы проверяют на мы­шах или цыплятах. В последнем случае используют 90-120-дневных цып­лят, которым культуру в дозе 0,1 мл вводят внутримышечно. Культуры P. haemolytica вызывают гибель белых мышей только при внутрибрюшиином заражении. Апробирована ПЦР для детекции
P. multocida в материале.


Понравилась статья? Добавь ее в закладку (CTRL+D) и не забудь поделиться с друзьями:  



double arrow
Сейчас читают про: