Таблица 73 - Критерии дифференциации биоваров P. haemolytica
Таблица 72 - Критерии дифференциации подвидов P. multocida
Таблица 71 - Основные дифференцирующие признаки видов рода Pasteurella
Идентификация пастерелл на уровне вида
Pasteurellaceae и рода Yersinia
Таблица 70 - Дифференцирующие признаки родов семейства
Признаки | Роды | |||
Actinobacillus | Haemophilus | Pasteurella | Yersinia | |
Вязкость колонии | + | - | - | - |
Подвижность при 22° С | - | - | - | Р |
Каталаза | Р | Р | + | + |
Оксидаза | Р | Р | Р | - |
Фосфатаза | + | + 1) | + | - |
Рост на агаре Мак-Конки | + | - | Р | + |
Тест метилрот (37°С) | - | Р | - | + |
Тест Фогес-Проскауера | Р | н.д. | - | |
Рост на среде с 0,5% NaCI | - | - | - | + |
Ферментация с образованием кислоты: Глюкозы | + | + | + | + |
Фруктозы | + | Р | + | + |
Ксилозы | + | Р | Р | Р |
Дульцита | - | - | -2) | - |
Инозита | - | -3) | Р | Р |
Инулина | - | -4) | - | - |
Гидролиз твина - 80 | - | - | - | Р |
Г + Д в ДНК, моль% | 40-43 | 38-44 | 40-45 | 46-50 |
1) Исключение — Н. haemoglobinophilus; P — признак различен в
2) Исключение — P. multocida и P. haemolytica; таксонах рангов (виды рода,
3) Исключение — Н. aprophilus и Н. parasuis; роды семейства); нд — нет данных
4) Исключение — Н. parasuis
Для видовой дифференциации пастерелл рекомендуется исследовать у культуры способность к росту на агаре Мак-Конки, образовывать бета-гемолизин, орнитин-декарбоксилазу, уреазу, индол, кислоту из глюкозы, лактозы, сахарозы, мальтозы, маннита. Биохимическую идентификацию можно проводить при помощи тест-системы API20 NE (Bio Mericx) и др.
Вид пастерелл | Признаки | |||||||||
Гемолиз | Рост на агаре Мак-Конки | Индол | Уреаза | Орнитин декарбоксилаза | Кислота (24-48 ч.) | |||||
Глюкоза | Лактоза | Сахароза | Мальтоза | Маннит | ||||||
P. multocida | - | - | + | - | (+) | + | (-) | + | (-) | (+) |
P. haemolytica | + | (+) | - | - | (-) | + | (+) | + | + | + |
P. pneumotropica | - | (-) | (+) | + | + | + | (+) | + | + | - |
P. canis | - | - | + /- | - | + | + | н.д. | н.д. | - | - |
P. dagmatis | - | - | + | + | - | + * | - | - | + | - |
P. caballi | - | - | - | - | + /- | + * | + | Н.Д. | (+) | + |
P.aerogenes | - | + | - | + | (+) | + * | (-) | + | + | - |
P. gallinamm | - | (-) | - | - | + /- | + | - | + | + | - |
(+) — преимущественно положительный результат; (-) — преимущественно негативный
результат; + * — газ и кислота из глюкозы; нд — нет денных; 1)- P. avium требует для роста на питательных средах НАД.
После установления видовой принадлежности пастерелл, если выделены культуры P. multocida и P. haemolytica, можно установить подвид P. muitocida или биовар P. haemolytica, что позволяет, используя эти признаки в качестве маркера возбудителя, более детально проводить анализ эпизоотической ситуации.
Идентификация серовариантов P. multocida
Определение сероваров возбудителя является обоснованием для использования вакцин, включающих конкретный серовар P. multocida. Серотипирование основано на антигенных различиях капсульного вещества (полисахарид), в соответствии с чем P. multocida подразделяют в РНГА на 5 сероваров (А, В, D, Е и F). По особенностям соматического антигена P. multocida также дифференцируют на серовары, которые обозначают цифрами.
В практических условиях дифференциация сероваров возбудителя в РНГА, из-за отсутствия коммерческих реагентов, пока недоступна, и поэтому прибегают к несерологическим методам, основанным на иных особенностях клеток пастерелл.
Поскольку серовар Е встречается в Африке, а серовар F выделен у индеек, то реально речь идет об установлении сероваров А, В и D. С этой исследуемую культуру пастерелл засевают на агар Хоттингера в шинках Петри с таким расчетом, чтобы был получен достаточно густой шсг изолированных колоний.
Одновременно, вслед за этим посевом по диаметру чашки одной пряной линией высевают бактериологической петлей бульонную культуру из штамма S. aureus, способного продуцировать фермент гиалуронидазу, и обычно сопряжено с хорошо выраженной гемолитической активностыо.
Подвид | Ферментация | ||||
Трегалоза | Д-Ксилоза | а -Арабиноза | Сорбит | Дульцит | |
P. multocida subsp. multocida | V | V | - | + | - |
Р. multocida subsp. seplica | + | + | - | - | - |
P. multocida subsp. gallicida | - | + | V | + | + |
V — варьирующий признак.
Посевы инкубируют при 37° С в течение 18-24 часов и просматривают в косопроходящем пучке света в стереоскопическом микроскопе МБС-1.
Колонии P. multocida серовара А, из-за расщепления гиалуронидазой стафилококка гиалуроновой кислоты в капсуле пастерелл, в отличие от колоний от сероваров В и D, тусклые, имеют серый или голубой цвет и не флуоресцируют.
Если испытуемая культура не относится к серовару А, то ее исследуют в трипафлавиновой пробе, которая, в принципе, предназначена для выявления у бактерий признаков диссоциации. Испытуемую культуру выращивают 24 часа при 37° С в 3-5 мл бульона Хоттингера, центрифугируют, осадок удаляют, седимент ресуспендируют в оставшейся жидкости и добавляют в пробирку 0,5 мл свежеприготовленного раствора трипафлавина (акрифлавин) 1:1000. Компоненты перемешивают и выдерживают 10-20 минут при комнатной температуре. Если взвесь бактерий стабильна, культуру относят к серовару В, выпала в осадок — к серовару D.
Признаки | Биовары | |
А | Т | |
Образование кислоты из: Арабинозы | + | - |
Ксилозы | + | - |
Трегалозы | - | + |
Салицина | - | + |
Чувствительность к пенициллину | Высокая | Слабая |
сероварианты | 1, 2, 5, 6, 7, 8, 9, 11, 12 | 3, 4, 10 |
Локализация в организме естественных хозяев | Носоглотка | Миндалины |
Ассоциация с патологией | Пневмонии крупного рогатого скота и овец, септицемия новорожденных ягнят | Септицемия новорожденных ягнят |
Проводят с целью выделения культуры возбудителя из исследуемого материала и определения патогенности выделенной культуры возбудителя. С целью выделения пастерелл из исследуемого материала готовят суспензию (1:10) и вводят подкожно в объеме 0,2 мл белым мышам. Приданном способе заражения удается определить наличие вирулентных штаммов Р. multocida. За животными наблюдают в течение недели. Для проверки патогенных свойств выделенных культур P. multocida суточной бульонной культурой заражают в дозе 0,2 мл подкожно белых мышей массой 16-18 г. Вирулентные штаммы (обычно серовар В) вызывают гибель животных в течение 24-72 часов, культуры сероваров А и D — в пределах семи суток. Патогенность культур, выделенных от птицы проверяют на мышах или цыплятах. В последнем случае используют 90-120-дневных цыплят, которым культуру в дозе 0,1 мл вводят внутримышечно. Культуры P. haemolytica вызывают гибель белых мышей только при внутрибрюшиином заражении. Апробирована ПЦР для детекции
P. multocida в материале.