Выделение и идентификация культур пастерелл

Микроскопическое исследование исходного материала

Бактериологическое исследование

Характер материала определяется наблюдаемым синдромом болезни. При септических явлениях объектом исследования являются части селезенки, печени, почек, сердце с перевязанными сосудами, лимфатические узлы, трубчатая кость. Трупы мелких животных направляют в лаборатории целиком. В случае поражения легких берут фрагменты на границе здоровой и пораженной ткани, экссудат из грудной полости, регионарные лимфатические узлы, миндалины. Прижизненно для исследования берут гной, экссудат, пробы со слизистой носовой полости, молоко от животных с маститом. Материал транспортируют в лабораторию в термосе со льдом, трубчатую кость обертывают марлей или ватой, смоченной 5-10%-ным формалином. Фрагменты органов можно пересылать в 30%-ном растворе глицерина.

Мазки из материала окрашивают по Граму и одним из методов, позво­ляющих обнаружить капсулу (Романовского-Гимза и т.д.). В препаратах пастереллы видны как короткие, с закругленными концами (овоидные) Грамотрицательные палочки размером 0,3-1,0х1-2 мкм, окруженные Капсулой, располагающиеся одиночно, парами, в виде коротких цепо­чек. При фиксации препаратов жидкостями, а не температурой клетки бактерий окрашиваются лучше. Достаточно характерно биполярное ок­рашивание клеток пастерелл, но следует иметь в виду, что ряд энтеробактерий, атакже актинобациллы проявляют склонность к биполярной ок­раске. Для выявления биполярности рекомендуется окрашивать мазки вод­но-спиртовым раствором пиоктанина в течение 1 минуты с подогревани­ем до отхождения паров. Микроскопическая картина: фон светло-синий, Полюса клеток темно-синие, центр клетки не окрашен. Приготовление раствора пиоктанина: пиоктанина — 0,12 г, этанола (96° С) — 6 мл, дис-тилированной воды — 20 мл.

Культивирование. Пастереллы — факультативные анаэробы, температурный оптимум 37° С (диапазон 25-40° С), птичьи штаммы растут при 42°С, оптимум рН пита­тельных сред 7,2-7,4. Для первичного культивирования используют обыч­ные МПА, МПБ, бульон и агар Хоттингера, но лучше — обогащенные сре­ды: кровяной, сывороточный агар и бульон. Следует отметить, что большин­ство штаммов P. avium обладают потребностью в НАД и для культивирова­ния этого вида пастерелл необходимо использовать специальные питатель­ные среды (см. «Гемофильные бактерии»). Для выделения пастерелл из носо­вой слизи целесообразно использовать элективную среду с клиндамицином. P. anatipestifer требует для своего роста обогащенные среды и 5, 10% СО₂. Инкубирование посевов проводят в течение 24-48 часов, при отсутствии роста — до 4-5 суток.

P. multocida на жидких средах растет с их равномерным слабым помут­нением. Позднее, по мере просветления среды, через 48-36 часов, на дне пробирки формируется слизистый осадок, поднимающийся при встряхива­нии в виде косички. Мукоидные штаммы растут с более интенсивным по­мутнением среды. На плотных средах через 24 часа культивирования фор­мируются круглые, выпуклые, с гладкой, влажной поверхностью, ровны­ми краями полупрозрачные колонии диаметром 1-3 мм. На кровяном ага­ре при росте P. multocida гемолиз отсутствует. Культуры
P. multocida cepoвара А образуют крупные (более 3 мм), слизистые колонии. В последующих пассажах может наблюдаться диссоциация и появление наряду с колония­ми S-формы шероховатых колоний R-формы.

P. haemolytica при росте на жидких питательных средах вызывает равномер­ное помутнение, обычно без формирования пристеночного кольца. На плотных средах через 24 часа культивирования формирует круглые, выпуклые, с ровны­ми краями полупрозрачные колонии. В результате культивирования на кровя­ном агаре с кровью крупного рогатого скота вокруг колоний образуется зона β-гемолиза, на агаре с кровью кролика, барана гемолитические свойства обнару­живаются только после снятия колонии с поверхности питательной среды.

Морфология клеток пастерелл в культуре. В мазках из культур клетки пастерелл обычно полиморфны, выглядят как мелкие грамотрицательные палочки, овоиды вплоть до кокков. Жгу­тиков не имеют. При окраске по методу Гинса у P. muttocida обнаружива­ется хорошо выраженная капсула.

Идентификация пастерелл на уровне рода. Классификация представителей недавно сформированного семейства Pasteurellaceae еще не завершена. Критерии дифференциации трех родов семейства довольно относительны, поэтому идентификацию целесообраз­но проводить сразу на уровне вида, хотя различать роды Actinobacillus, Pasteurella, Haemophilus, а также сходных представителей рода Yersinia (семейство Enterobacteriaceae) можно с учетом свойств, изложенных в таблице 70.