Билет №8 тепловая стерилизация

1. Методы стерилизации.

Существует три основных метода стерили­зации: тепловой, лучевой, химической.

Тепловая стерилизация основана на чувстви­тельности микробов к высокой температуре. При 60 "С и наличии воды происходит денату­рация белка, деградация нуклеиновых кислот, липидов, вследствие чего вегетативные фор­мы микробов погибают. Споры, содержащие очень большое количество воды в связанном состоянии и обладающие плотными оболоч­ками, инактивируются при 160—170 °С.

Для тепловой стерилизации применяют, в основном, сухой жар и пар под давлением.

Стерилизацию сухим жаром осуществля­ют в воздушных стерилизаторах (прежнее название — «сухожаровые шкафы или печи Пастера»). Воздушный стерилизатор пред­ставляет собой металлический плотно закры­вающийся шкаф, нагревающийся с помощью электричества и снабженный термометром. Обеззараживание материала в нем произво­дят, как правило, при 160 °С в течение 120 мин. Однако возможны и другие режимы: 200 °С - 30 мин, 180 "С - 40 мин.

Стерилизуют сухим жаром лабораторную посуду и другие изделия из стекла, инстру­менты, силиконовую резину, т. е. объекты, которые не теряют своих качеств при высокой температуре.

Обработка паром под давлением в паровых стерилизаторах (старое название — «автокла­вы») - создается повышенное давление, что приводит к увеличению температуры кипения.2 атм — 121 °С — 15—20 мин. Время стерилиза­ции уменьшается при повышении атмосфер­ного давления, а следовательно, и температуры кипения (136 °С — 5 мин). Стерилизуют в автоклаве бульшую часть предметов: перевязочный материал, белье, коррозионно-устойчивые металлические инструменты, питательные среды, растворы, инфекционный материал и т. д.

Одной из разновидностей тепловой стери­лизации является дробная стерилизация, ко­торую применяют для обработки материалов, не выдерживающих температуру выше 100 °С, например, для стерилизации питательных сред с углеводами, желатина. Их нагревают в во­дяной бане при 80 °С в течение 30—60 мин.

В настоящее время применяют еще один метод тепловой стерилизации, предназначен­ный специально для молока — ультравысоко­температурный (УВТ): молоко обрабатывают в течение нескольких секунд при 130—150 °С.

Химическая стерилизация предполагает ис­пользование токсичных газов: оксида этиле­на, смеси ОБ (смеси оксида этилена и бро­мистого метила в весовом соотношении 1:2,5) и формальдегида. Эти вещества являются алкилирующими агентами, их способность в присутствии воды инактивировать активные группы в ферментах, других белках, ДНК и РНК приводит к гибели микроорганизмов.

Стерилизация газами осуществляется в присутствии пара при температуре от 18 до 80 °С в специальных камерах. В больницах используют формальдегид, в промышленных условиях — оксид этилена и смесь ОБ.

Лучевая стерилизация осуществляется либо с помощью гамма-излучения, либо с помо­щью ускоренных электронов.

Пастеризация-обеспложиварие многих пищепродуктов. Спор м/о не уничтожаются. проводят при 65-80С в течении 10-60мин

фильтрование. Фильтрование с помощью раз­личных фильтров (керамических, асбестовых, стеклянных), а в особенности мембранных уль­трафильтров из коллоидных растворов нитроцеллюкозы или других веществ позволяет освободить жидкости (сыворотку крови, лекарства) от бак­терий, грибов, простейших и даже вирусов. Для ускорения процесса фильтрации обычно создают повышенное давление в емкости с фильтруемой жидкостью или пониженное давление в емкости с фильтратом.

2. М/б дизентерия

Шигеллы — кишечные патогены человека и приматов..

4 вида: Shigella dysenteriae, Shigellaflexneri, Shigella boydii и Shigella sonnei. Род образуют прямые неподвижные палочки, хемоорганотрофы, оксидаза-отрицательные, каталаза- положительные.

распространена повсеместно

Ественный природный резервуар шигелл — человек.

Основные механизмы передачи — фекально оральный и контактнобытовой.

По морфологическим признакам шигеллы не отличимы от других представителей семейства Enterobacteriaeeae. Бактерии капсул не имеют, на твёрдых средах образуют гладкие (S-) и шероховатые (R-) колонии.

По сравнению с прочими кишечными бактериями биохимически шигеллы инертны.

Известны термостабильные и термолабильные Аг.

Важнейшее свойство шигелл, обусловливающее их патогенность, — способность проникать в эпителий слизистой оболочки толстой кишки и размножаться в нём. Массовая гибель эпителиальных клеток приводит к появлению дефектов слизистой оболочки и проникновению бактерий в подлежащие ткани.. Патогенность шигелл обусловливают факторы адгезии, инвазии и устойчивости к действию защитных механиз-мов, а также способность к токсинообразованию..

Цитотоксин (токсин Шига) состоит из двух компонентов. Компонент А вызывает необратимое нарушение синтеза белка и гибель клетки; компонент В обусловливает связывание токсина с клеточным рецептором на поверхности клеток микроворсинок. Токсин нарушает синтез белка, всасывание Na* и воды, вызывает гибель клеток и приток жидкости в очаг поражения.

ДИАГНОСТИКА

Материалом для исследований служат испражнения.

1)Выполняют посев либо на дифференциально-диагностические среды Эндо и Плоскирева, либо на жидкую селенитовую среду накопления с последующим пересевом на дифференциально диагностические среды. 2)Определение антигенных свойств имеет эпидемиологическое значение. Об антигенной структуре судят по способности моно- и поливалентных антисывороток агглютинировать бактерии.

3)Для быстрого распознавания шигелл можно провести посев на агар Клиглера; бактерии ферментируют только глюкозу, не образуют газ при ферментации глюкозы.

4)Для выявления Аг шигелл в крови, моче и испражнениях используют РПГА, PC К, ИФА и реакцию коагглютинации (при исследовании мочи и испражнений). Для определения AT используют РПГА с соответствующими эритроцитарными диагностикумами и метод непрямой иммунофлюоресценции.

3. Методы контроля сан сост прод участков
3. Методы контроля сан сост прод участков
Санитарно-микробиологические исследования проводят:
а) при текущем санитарном надзоре за продовольственными объектами-
б) по эпидемиологическим показаниям (при расследовании пищевых отравлений и случаев инфекционных заболеваний);
в) при контроле качества дезинфекции.
способы отбора проб: тампонных смывов, отпечатков, агаровой заливки. Из них наиболее часто используют способ тампонных смывов.
Санитарно-микробиологический контроль основан на обнаружении в смывах бактерий группы кишечных палочек (БГКП) — показателей фекального загрязнения исследуемых предметов. Исследования на стафилококк, патогенные бактерии семейства кишечных, определение общей микробной обсемененноеTM проводят по показаниям.
Смывы с рук персонала, занятого обработкой сырых продуктов, забирают до начала работы. Смывы со специальной одежды, полотенец берут у поварского состава и лиц, соприкасающихся с чистой посудой и готовою. Предметами исследования являются: оборудование, инвентарь, посуда, специальная одежда и руки персонала.
Смывы берут с помощью стерильных увлажненных тампонов. Ватные тампоны на палочках, вмонтированных в пробирки с ватными пробками, заготовляют заранее в лаборатории
Смывы с крупного технологического оборудования и кухонного инвентаря берут с поверхности 100 см2.
В день взятия смывов в каждую пробирку с тампоном наливается стерильный раствора пептона или изотонического раствора натрия хлорида, чтобы тампон не касался жидкости. Перед взятием смыва тампон увлажняют наклонением пробирки или опусканием в жидкость. В процессе отбора смывов рекомендуется неоднократное смачивание тампонов.
После проведения смыва тампон вкладывают в ту же пробирку, погружая в жидкость. Смывы доставляются в лабораторию в течение 2 ч. Допускается не более 6 ч при температуре не выше +10°С.
В лаборатории производят посевы смывов на среды Кесслер с лактозой или КОДА и инкубируют при 37°С.
Через 18-24 ч из всех пробирок со средой Кесслер производят высев на секторы чашек со средой Эндо, со среды КОДА высев производят только в случае изменения окраски среды (из исходной фиолетовой до желтой или зеленой) или ее помутнения. Из колоний БГКП, готовят мазки, окрашивают по Граму, микроскопируют, идентифицируют по общепринятым тестам для БГКП. При оценке результатов санитарно-микробиологического обследования исходят из нормативов, что в смывах, взятых с объектов продовольственного назначения, БГКП должны отсутствовать.
Обнаружение БГКП в смывах с поверхностей чистых, подготовленных к работе предметов инвентаря, оборудования, рук и санитарной одежды персонала свиде-тельствует о нарушении санитарного режима.

Билет №9

1. Вирусы - мельчайшие неклеточные биологические объекты, обширная группа уникальных микроорганизмов, расположенных на границе жизни, отличительными признаками которых являются обязательный паразитизм на генетическом аппарате живых клеток (растения, бактерии, насекомых, животных) и наличие в геноме нуклеиновой кислоты только одного типа.

Основоположником вирусологии является российский ученый Д. И Ивановскии (1864-1920), открывштй на рубеже 19 и 20 вв мир вирусов, по мозаично болезри табака.

Гипотезы происхождения вирусов:

Вирусы потомки доклеточной формы жизни

Вирусы - результат регрессивной эволюции одноклеточных организмов

Вирусы произошли от определенных клеточных генов, приобревшие способность покидать клетку и в нее возвращаться.

Морфология вирусов:

Вирус находящиися внутри клетки-вирион. Выделяют:

Спир тип симметрии(рабдовирусы, вирусы гриппа, парагриппа, короновирусы)

Квазисфер.-кубический или икосаэдральн. тип симм.

Смешан. у т-четных бактериофагов(головка в виде многогранника, хвост в виде спирали).

Многие вирусы имеют суперкапсид-дополнительную оболочку сложных вирусов, или пеплос. Большинство вирусов, патогенны для человека,-сложные. Если у вируса нет суперкапсида-простые вирусы.

Репродукция вирусов: (ранняя и поздняя фазы)

Ранняя фаза включает:

Адсорбция вириона на клетке

Проникновение в клетку-пенетрация

Раздевание вириона

2. Возбудитель чумы - Yersinia pestis. Открыт в 1894г швейцарским бактериологом А. Йерсеном.

Возбудители чумы представлены мелкими грамм – палочками, имеющими овоидную форму 1,5-0,5мкм. Жгутиков и спор нет.

Факторы патогенности:

Фракция1(F 1)-поверхн. гликопротеиновый капсульный аг защищает от фагоцитоза;

Мышиный токсин-особый белок антогонист адренергических рецепторов(вызывает шок и смерть)

V\W -антигены(V -фракция преставлена белком, W -липопротеином)защита от фагоцитоза

Активатор плазминогена-фермент протеаза, лизис сгустков фибрина,инакт. С3 иС5 компоненты коплемента.

Бактериоцины (пестицин1 и 2),антагонист других йерсиний и прочих бактерий

Метаболизм зависит от температуры, опт. 28, pH 6,9-7,1. Хорошо растет на обычных питат средах, для подавления микрофлоры- добавляют генцианвиолет. 1-сут.-на плотных питат средах-мелкие колонии-фаза битого стекла. Затем фаза платочков

Хорошо резист.-в трупе до полугода.

Диагностика в спец противочумных институтах, станциях, в ВС РФ-специальные противочумные отр. и отд. особоопасных инфекций ГСЭН а военных округов и флотов.

Диагностика- окр по Граму и Роман.-Гимзе. Р-я агглют., РНГ, РИФ, ИФА.

Б/Х свойства. Поспособности ферме6нтировать мелибиозу и глицерин выделяют биовары:

Orientalis (не фер-ют, встреч. повсемест.)

Antigua (не фер-мелибиозу, но фер-глицерин: Центр Азия, Африка.)

Medievalis (фер-ет,-Иран, Ср Азия)

Спец. Профил. - живой противочумной вакцины(штамм EV),антибиотики

Лечение:стрептомицин, гентамицин, альтернативн препараты: тетрациклин, доксициклин, хлорамфеникол, ципрофлоксацин.

Большой вклад-Д. Самойлович, Д. Заболотный, С. Златогоров.

3. Иммуно ферментный анализ(ИФА)

Принцип ИФА аналогичен непрямому варианту метода флюоресцирующих антител.

Исследуемую взвесь микробов, фикс. на внутренней поверхности синтет. планшетов для иммунолог. реакций, добавляют сыворотку, меченую ферм.(уреаза, пероксидаза, ЩФ и др). используют обычн. Диагност. сыворотки против какого либо вида микробов. Добавление вызывает образование комплекса АГ-АТ. Этот комплекс выявляется с помощью универс. флуоресцирующей сыворотки. Для образования комплекса аг-ат препарат помещают во влажную камеру 37С, затем промывают водой от несвязавшихся антител. Реакция учитыв. визуально, после добавления субстрата данного фермента. Для объективной оценки ИФА используют спец фотометры с вертикальным ходом лучей