Методы санитарно-микробиологического анализа воды

Определение микробного числа воды предполагает исследование общего количества мезофильных аэробов и факультативных анаэробов в 1мл. исследуемой воды, способных при 37 ºС в течение 24 часов образовывать на МПА колонии, видимые невооруженным глазом и при увеличении в 2-5 раз. В зависимости от степени загрязнения воды готовят последовательно ее 10-кратные разведения от 1:10 для чистых до 1:10000 для сильнозагрязненных сточных вод. При исследовании водопроводной воды в каждую из двух чашек вносят по 1мл. неразведенной воды и заливают 10-12 мл растопленного и остуженного до 45 ºС МПА, а для выявления роста грибов – сусло-агара. Посевы на МПА выращивают в течение суток при 37 ºС, а на сусло-агаре – 2-3 суток при 27 ºС. Учет колоний производится с использованием лупы, на чашках, где выросло не более 300 колоний. Микробное число питьевой воды централизованного водоснабжения не должно превышать 100 микробных клеток в 1 мл.

Определение кишечных палочек обычно проводят с использованием метода титрации – двухэтапный бродильный метод и метода мембранных фильтров. Анализ воды проводят согласно ГОСТа 18963-73 в трех параллельных рядах, начиная с 10; 1 и 0,1 мл. Для объемов 10 мл используют флаконы по 100 мл лактозно-пептонной среды. Все остальные объемы воды вносят в пробирки с 5 мл питательной среды. На выходе в водопроводную сеть в водопроводной воде исследуют три объема по 100 мл воды, три объема по 10 мл воды и три объема по 1 мл. Для этого осуществляют посевы по 100 мл воды на концентрированную глюкозопептонную среду и по 10 мл и по 1 мл воды на разведенную среду. Культивирование посевов производят при 38ºС в течение 24 часов. В случае отсутствия помутнения среды и образования газа через сутки, дается отрицательный ответ. При наличии помутнения среды кислоты и газа из такого флакона производят посев секторами на чашки со средой Эндо, чтобы получить изолированные колонии. Если через 16-18 часов на среде выросли темно-красные с металлическим блеском или без него колонии, из них готовят мазки и проводят пробу на оксидазу. Для этого со среды Эндо снимают по 2-3 колонии каждого типа и наносят на фильтровальную бумагу, смоченную диметил-n-фенилендиамином.

Наличие в мазках граммотрицательных палочек и отсутствие оксидазы свидетельствует о положительном результате исследований, которые выражают в виде коли-индекса, т.е. количества бактерий кишечных палочек в 1 л воды. Для питьевой воды централизованного водоснабжения коли-индекс не должен быть больше трех.

При определении свежего фекального загрязнения из трех объемов лактозо-пептонной среды, в которых после инкубации при 37ºС в течение 24 часов наблюдалось выделение газа, петлей материал высевают в лактозную среду с борной кислотой. Культивирование на элективной среде производят при 43ºС в течение суток. Наличие газа и помутнений среды указывает на свежее фекальное загрязнение воды. Если среда только помутнела без газообразования, результат не учитывается. Определение индекса фекальных кишечных палочек и бактерий группы кишечных палочек проводят по таблице 2.

Таблица 2

Определение индекса бактерий группы кишечных палочек

Метод мембранных фильтров предполагает фильтрование воды в количествах 100, 10 и 1 мл для чистой воды и 0,1; 0,01 мл для загрязненных вод. Начинают исследования с больших разведений.

При посевах объемом 1 мл и меньше их разводят в 10 мл стерильной водопроводной воды, а затем фильтруют. После окончания фильтрации изучаемого объема мембранные фильтры снимают стерильным пинцетом и помещают на поверхность среды Эндо фильтрующей поверхностью вверх. На одну чашку помещают до 3-4 мембранных фильтров. Инкубируют чашки с фильтрами при 37 ºС в течение 18-24 часов. Для учета колоний выбирают фильтры с количеством колоний от 10-50. Для расчета коли-индекса количество бактерий группы кишечных палочек, выросшие в анализируемом объеме воды, умножают на 1000 и делят на этот объем. Следует отметить, что методом мембранных фильтров обычно определяется меньшее число бактерий, чем методом титрации.