Иммуноферментный метод

Метод приобретает все большую популярность благо­даря высокой чувствительности и простоте постановки (проще, чем иммунофлюоресценция или радиоиммуноопределение). Ос­нован на конъюгации фермента либо с Аг, либо с Ат и количес­твенном учете активности фермента. В зависимости от вида ис­пользованного фермента и системы Аг—Ат разработаны различные варианты метода.

Широко распространенным вариантом является ферментсвя-занное иммуносорбционное определение. Используемое для уста­новления концентрации Аг и Ат. Для определения Ат известный Аг фиксируют на твердофазном носителе (полистироловые, по­ливиниловые пластины или пробирки), инкубируют с разведен­ной испытуемой сывороткой, отмывают и обрабатывают антиим-муноглобулином, меченным ферментом, например пероксидазой хрена. Активность фермента Измеряют добавлением специфичес­кого субстрата: регистрируют изменения и измеряют этот сдвиг колориметрически. Активность фермента пропорциональна ко­личеству связавшихся антител.

Для измерения Аг известное специфическое Ат фиксируют на твердой фазе, добавляют испытуемую пробу, содержащую Аг,

отмывают, обрабатывают теми же антителами, но меченными фер­ментом. Для осуществления реакции необходимо, чтобы антиген имел по меньшей мере две детерминанты. После отмывки добав­ляют субстрат и измеряют активность фермента, на основании чего определяют концентрацию Аг.

Метод иммуноблотинга (Western blot)

Метод иммунного блотинга позволяет произвести элек-трофоретическое разделение вирусных белков (Аг) с последую­щим перенесением их на мембрану из нитроцеллюлозы. Затем мембрана обрабатывается испытуемой сывороткой. Заключитель­ный этап исследования состоит в выявлении антител к различ­ным белкам возбудителя, для чего в систему добавляют антивидо­вые меченые сыворотки.

Индикацию образовавшихся иммунных комплексов проводят с использованием иммуноферментного или радиоиммунного ана­лиза. С помощью метода иммунного блотинга определяют анти­тела к одному или нескольким белковым антигенам возбудителя; используется в лабораторной диагностике вирусных инфекций, например, СПИДа.