2015-03-20
425
В две центрифужные пробирки с 0,25 мл 2%-ного цитрата натрия вносят по 0,5 мл исследуемой цельной капиллярной или венозной крови, взятой натощак, добавляют 0,25 мл 2 млрд взвеси суточной микробной культуры (S. aureus 209Р или Е. coli Гусев), предварительно подогретой до 37ºС. Лейкоцитарно-микробную смесь инкубируют при 37°С; одну пробирку – в течение 30 мин, другую – в течение 120 мин. Пробирки периодически встряхивают. После окончания инкубации пробирки центрифугируют, из осадков готовят мазки. Мазки высушивают, фиксируют в смеси Никифорова 10 мин, окрашивают по Романовскому-Гимзе 15 мин, промывают дистиллированной водой и высушивают.
Готовые окрашенные мазки микроскопируют с иммерсией. Неразрушенные микроорганизмы окрашены в темно-фиолетовый цвет, хорошо контурируются. Убитые микроорганизмы окрашены в различные оттенки розового цвета, уменьшены в размерах. В разных полях зрения находят не менее 25 лейкоцитов и считают количество микробов, поглощенное каждым лейкоцитом. Для характеристики фагоцитарной активности крови подсчитывают ФП, ФЧ и ИЗФ.
ФП – это процент активно фагоцитирующих лейкоцитов в расчете на 100 лейкоцитов.
ФЧ – среднее количество микробов, поглощенных одним фагоцитом (для этого общее число поглощенных микробов делят на количество подсчитанных клеток – 25).
ИЗФ – среднее число поглощенных микроорганизмов через 30 мин отнесенное к среднему числу поглощенных микроорганизмов через 120 мин.
Для лейкоцитов крови здоровых людей ФП колеблется от 40 до 80%, ФЧ – от 4 до 10.
Протокол
Цель:
| Рис. с обозначениями | Фагоцитарный показатель и число, индекс завершенности фагоцитоза |
Вывод: (Ответить на вопросы: 1. Соответствует ли ФП, ФЧ и ИЗФ значениям нормы? 2. Возможные причины снижения ФП, ФЧ и ИЗФ?)
Р а б о т а№2
Цель: Изучить незавершенный фагоцитоз гонококка
Задание. Микроскопировать с иммерсией и объективом ´90 фиксированный препарат, приготовленный из гнойного отделяемого больного гонореей, окраска по Граму. Оформить протокол.
Протокол
Цель:
Рис. с обозначениями
Вывод: (Ответить на вопросы: 1. Какой метод исследования применен? 2. В чем причина незавершенного фагоцитоза гонококков?)
| занятие №3 : | Система комплемента. Антимикробные пептиды и белки Изучение активности гуморальных факторов врожденного иммунитета |
| УЧЕБНАЯ Цель: | 1. Изучить гуморальные факторы врожденного иммунитета 2. Познакомиться с методами определения активности гуморальных факторов врожденного иммунитета. 3. Овладеть навыками определения и оценки естественной резистентности организма человека. |
Вопросы для подготовки
1. Бактерицидные пептиды (дефензины, кателицидины и т.д.) и их роль во врожденном иммунитете. Механизмы действия на бактериальную клетку.
2. Система комплемента. Особенности альтернативного, лектинового и классического путей комплемента.
3. Альтернативный путь комплемента.
4. Классический путь комплемента.
5. Эффекторные факторы комплемента: относительная роль опсонизации и лизиса. Малые фрагменты комплемента.
6. Белки острой фазы. Пентраксины. Роль во врожденном иммунитете.
7. Лизоцим. Роль во врожденном иммунитете.
8. Лактоферрин. Роль во врожденном иммунитете.
