Самостоятельная работа студентов. 1. Определение коли-фага в фильтрате речной воды (демонстрация)

1. Определение коли-фага в фильтрате речной воды (демонстрация). На поверхность МПА в чашке Петри «густым газоном» засевают культуру кишечной палочки. На посев наносят 1 - 2 капли воды, профильтрованной через бактериальный фильтр. Закрыв чашку Петри крышкой, оставляют посев на столе на 5 минут. Затем посев ставят на сутки в термостат. В положительном случае в зоне нанесения фильтрата наблюдается «стерильное» пятно.

2. Определение титра коли-фага в жидкой питательной среде по Аппельману (демонстрация). Ряд пробирок содержит по 4,5 мл МПБ. В первую пробирку вносят 0,5 мл исследуемого фага, получая разведение 1:10, затем после перемешивания 0,5 мл материала переносят во вторую пробирку (разведение 1:100) и т.д. Из последней пробирки 0,5 мл содержимого удаляют. Затем во все пробирки вносят по 1 капле бульонной культуры кишечной палочки и пробирки помещают на 24 часа в термостат. Титр фага определяют по максимальному разведению, при котором наблюдается лизис микробов (например 10^-5).

3. Определение спектра литического действия дизентерийного фага (демонстрация). Чашку с МПА делят на 4 сектора. На каждый сектор петлей наносят каплю бульонной культуры Sh.sonnei, Sh.dysenteriae, Sh.flexneri, Sh.boydii соответственно и равномерно распределяют по поверхности агара. Затем на каждый сектор наносят по капле исследуемого фага. После инкубации в термостате в течение суток при 37⁰ С выявляют сектора, где имеется лизис бактерий или «стерильные» пятна.

4. Фаготипирование культуры золотистого стафилококка (демонстрация). Бульонную культуру стафилококка в количестве 0,5 мл вносят в расплавленный и охлажденный до 45⁰ С 0,7% МПА, перемешивают и распределяют по поверхности чашки с 2% МПА. Чашку делят на квадраты, в которые вносят по капле различных типовых стафилококковых фагов. После инкубации в термостате отмечают квадраты, в которых имеется лизис бактерий и по специальной таблице определяют фаговар выделенной культуры.

5. Определение лизогении культуры возбудителя брюшного тифа (демонстрация). Исследуемую культуру засевают на МПБ, через сутки ее центрифугируют. Надосадочную жидкость, содержащую свободный фаг, переносят на посев индикаторной брюшнотифозной культуры в чашке Петри, инкубируют в термостате при 37⁰ С в течение суток. Если исследуемая культура лизогенная, на посеве индикаторной брюшнотифозной культуры обнаруживают «стерильные» пятна.

6. Определение лизогении культуры возбудителя брюшного тифа (демонстрация). Исследуемую культуру засевают на МПБ, через сутки ее центрифугируют. Надосадочную жидкость, содержащую свободный фаг, переносят на посев индикаторной брюшнотифозной культуры в чашке Петри, инкубируют в термостате при 37⁰ С в течение суток. Если исследуемая культура лизогенная, на посеве индикаторной брюшнотифозной культуры обнаруживают «стерильные» пятна.

7. Изучение биопрепаратов фага, применяемых для профилактики и лечения бактериальных инфекций (стафилококковый бактериофаг, коли-фаг, сальмонеллезный бактериофаг, коли-протейный фаг, дизентерийный бактериофаг, протейный фаг, брюшнотифозный бактериофаг, стрептококковый фаг, паратифозный бактериофаг, холерный фаг Эль-Тор, холерный фаг классический).

8. Изучение препаратов бактериофагов, применяемых для диагностики бактериальных инфекционных болезней (индикаторные фаги - типовые стафилококковые, чумной, сибиреязвенный, бруцеллезный).