Определение микробной загрязненности лекарственных средств, не обладающих антимикробным действием (демонстрация)

а). Определение общего числа бактерий. 1 мл препарата, разведенного 1:10, вносят в 2 пробирки с 4 мл расплавленного и охлажденного до 45-50⁰ С МПА с 0,1% глюкозой. Содержимое пробирок переливают в чашки Петри, которые инкубируют при 37⁰ С 5 суток. Подсчитывают число колоний бактерий в демонстрационных посевах.

б). Определение бактерий кишечной группы. Исследуемые образцы лекарственных препаратов внесены в среду обогащения для бактерий семейства Enterobacteriaceae с последующей инкубацией при 37⁰ С 24-48 часов. При наличии роста делают пересевы петлей на среду Эндо (колонии энтеробактерий) и висмут-сульфит агар. Инкубируют при 37⁰ С 24-48 часов. На среде Эндо бактерии семейства Enterobacteriaceae образуют крупные малиновые или розовые колонии, иногда бесцветные, блестящие, выпуклые, диаметром 2-4 мм, с металлическим блеском или без него). На висмут-сульфит агаре колонии черные (или зеленовато-бурые, светло-зеленые, коричневые и т.д.) с характерным металлическим блеском, среда под колониями окрашена в черный цвет. В мазках из колоний при микроскопии обнаруживают грамотрицательные палочки, не образующие спор. Типичные для E.coli колонии пересеяны на скошенный МПА с 0,1% глюкозой и выращены при 37⁰ С 24 часа. Из каждой пробирки с чистой культурой выполнены пересевы на среды для идентификации энтеробактерий. Ознакомиться с характером роста E.coli на среде Эндо и висмут-сульфит агаре.

3. Определение микробной загрязненности лекарственных средств, обладающих бактерицидным действием, включая антибиотики (демонстрация). Приготовленный раствор антибиотика фильтруют через 4 мембранных фильтра (по 250 мл раствора через каждый фильтр), затем фильтры отмывают от антибиотика, помещают в чашки Петри на следующие среды, содержащие инактиваторы лекарственного препарата:

· на МПА для определения общего количества микроорганизмов;

· на среду Эндо для определения микроорганизмов кишечной группы;

· на кровяной агар для обнаружения патогенных стафилококков (патогенные стафилококки вокруг колоний образуют зону гемолиза). Инкубация на всех трех средах проводится при 37⁰ С в течение 3 суток;

· на среду Сабуро для определения общего количества плесневых и дрожжевых грибов (инкубация при 24⁰ С 5 суток).

Суспензии из таблеток антибиотиков выливают непосредственно по 0,2 мл на поверхность агаровых сред (по 3 чашки Петри на каждую среду).

Ознакомиться с результатами посевов.

4. Определение стерильности инъекционных препаратов (полиглюкина). Посевы выполнены на МПА с 0,5% глюкозой, среду Китт-Тароцци (инкубация при 7⁰ С в течение 5 суток), жидкую среду Сабуро (инкубация при 24⁰ С 5 суток). Дать заключение о стерильности препарата.