Разделение углеводов методом бумажной хроматографии

1. На полоске хроматографической бумаги отмечают линию старта (1-1,5 см от края бумаги), а так же места нанесения стандартных растворов углеводов и анализируемой смеси.

2. Микропипеткой наносят на хроматографическую бумагу по 2mл каждого раствора. Нанесение проводят в несколько приемов, следя за тем, чтобы пятно раствора не растекалось более чем на 3 мм. Каждую последующую порцию раствора наносят после полного высыхания предыдущей, что определяют по исчезновению просвечивания бумаги в точке нанесения.

3. Места нанесения образцов высушивают.

4. Параллельно готовят растворитель изопропанол: вода в соотношении 4:1 объемом 20 мл.

5. Растворитель заливают в хроматографическую камеру, герметично закрывают и оставляют на некоторое время для насыщения камеры парами растворителя.

6. Бумажную полоску помещают в хроматографическую камеру. Хроматографическое разделение заканчивают, когда фронт растворителя переместится к противоположному концу полоски бумаги (2-3 см от края).

7. Хроматограмму высушивают.

8. Углеводы идентифицируют путем опрыскивания хроматограммы 1% водным раствором KMnO₄, содержащим 2% Na₂CO₃, и последующего высушивания полоски бумаги при комнатной температуре.

9. Спиртосахара, гликозиды, восстанавливающие, невосстанавливающие сахара дают желтые пятна на пурпурном фоне, а затем (со временем) серые пятна на коричневом фоне.

10. Определяют значения R_f стандартов углеводов и углеводов в анализируемой смеси. Идентифицируют углеводы, содержащиеся в анализируемой смеси.