Тема: гликопротеины и протеогликаны

Установление гликопротеиновой природы яичного альбумина

Получение препарата яичного альбумина

1. Отделяют белок куриного яйца от желтка (считается, что масса белка в одном яйце в среднем равна 30 г, а общая концентрация белка составляет ~10%). Отделенную белковую часть хорошо взбивают.

2. Белок переносят в мерный цилиндр и добавляют к нему девятикратный объем дистиллированной воды.

3. Полученный раствор тщательно перемешивают и фильтруют через двойной слой смоченной водой марли, помещенной в воронку. При этом в осадке остается часть не растворившегося яичного глобулина.

4. Для полного удаления яичного глобулина из раствора овальбумина к 40 мл фильтрата приливают такой же объем насыщенного раствора сульфата аммония.

5. Выпавший осадок яичного глобулина отфильтровывают и получают ~0,5% раствор яичного альбумина (средняя концентрация альбумина в белке куриного яйца составляет около 6%).

Доказательство наличия углеводного фрагмента
в яичном альбумине

1. В две пробирки приливают по 4 мл полученного раствора яичного альбумина.

2. В одну из них добавляют 0,5 мл 0,1% раствора a-нафтола, а в другую – 0,5 мл 1% раствора тимола, и содержимое каждой пробирки хорошо перемешивают.

3. В обе пробирки осторожно по стенке наслаивают по 1 мл концентрированной серной кислоты.

4. Через некоторое время наблюдают появление окрашенных колец на границе растворов и делают выводы.

Тема: МЕТОДЫ КОЛИЧЕСТВЕННОГО
ОПРЕДЕЛЕНИЯ УГЛЕВОДОВ

Определение концентрации глюкозы в крови орто-толуидиновым методом

1. В пробирку сначала вносят 0,9 мл 3% раствора ТХУ и затем добавляют 0,1мл сыворотки крови.

2. Смесь взбалтывают и для удаления осадка белка центрифугируют при 8000g в течение 5 мин.

3. К 0,5 мл супернатанта добавляют 4,5 мл о-толуидинового реактива.

4. Пробирку со смесью помещают в кипящую водяную баню на 8 мин., после чего содержимое пробирки охлаждают.

5. Оптическую плотность раствора определяют при длине волны 590 нм против холостой пробы (дистиллированная вода).

6. Концентрацию глюкозы (в ммоль/л) в сыворотке крови определяют по калибровочному графику.

Для построения калибровочного графика в пробирки вместо 0,1 мл сыворотки крови вносят по 0,1 мл стандартных растворов глюкозы с концентрациями 5,55 ммоль/л и 16,67 ммоль/л.