1. Готовят опытную, стандартную и холостую пробы в соответствии с таблицей:
Отмерить (мл) | Опытная проба | Стандартная проба | Холостая проба |
Надосадочная жидкость | 0,1 | – | – |
Стандарт молочной кислоты | – | 0,2 | – |
ТХУ | – | – | 0,2 |
Вода | 0,1 | – | – |
Смесь* | 0,1 | 0,1 | 0,1 |
Серная кислота, конц. | 2,5 | 2,5 | 2,5 |
2. Пробы тщательно перемешивают.
3. Пробирки энергично встряхивают и точно через 3 мин помещают ровно на 3 мин в кипящую водяную баню, затем еще 3 мин охлаждают в ледяной бане.
4. Далее добавляют 0.15 мл (1 каплю) раствора п -оксидифенила в диметилформамиде (наносить нужно точно в центр пробирки), тщательно перемешивают и оставляют стоять 10 мин при комнатной температуре.
5. После этого нагревают на кипящей водяной бане 1.5 мин и охлаждают в воде.
6. Оптическую плотность в опытной пробе определяют спектрофотометрически при длине волны 565 нм против холостой пробы (контроля).
7. Расчет количества молочной кислоты в пробах производят по формуле:
где С – концентрация молочной кислоты в исследуемой пробе, А – оптическая плотность исследуемой пробы, Сст – концентрация молочной кислоты в стандартной пробе (2,5 ммоль/л), Аст – оптическая плотность стандартной пробы, 2 – разведение проб при осаждении.