Порядок выполнения работы. Приготовление посевной и ферментационной сред

Приготовление посевной и ферментационной сред

Таблица 11.3.1

№ варианта	рН фермента-ционной среды	% сухих веществ	% РВ

Получение спор. Asp. niger выращивают в чашках Петри на сусло-агаровой среде. 7-8 суточные конидии собирали для последующего культивирования в жидкой среде. Споры с поверхности чашек собирают жидким способом (5 мл стерильной воды).

Посевная сахарозоминеральная среда: (г/л) сахароза – 12,5; KH2PO4 или K2HPO4 – 10; MgSO4•7H2O – 10; (NH4)2SO4 – 10; KCl – 0,5; FeSO4 – 0,01; ZnSO4 – 0,05.

Культивирование посевной сахарозоминеральной среды проводится не менее 36 часов.

Посевная глюкозоминеральная среда: (г/л) глюкоза – 24;

NH4Cl – 2,0; KH2PO4 – 1,0; MgSO4•7H2O – 0,2; ZnSO4 – 0,01;

MnSO4 – 0,005.

Культивирование посевной глюкозоминеральной среды проводится не менее 24 часов.

Посевные среды готовятся в количестве 50 мл в колбах на 250 мл. Суспензия спор вносится в количестве 1 мл.

Культивирование проводится на качалке при 200 об/мин t=37-38⁰С.

Ферментационная сахарозоминеральная среда, (г/л):

Вариант № 1. Сахароза – 30; аспарагин – 1,0; NH4NO3 –0,6; KH2PO4 – 1,0; MgSO4•7H2O – 0,5.

Вариант № 2. Сахароза – 30; аспарагин – 2,0; KH2PO4 – 1,0; MgSO4•7H2O – 0,5; CaCO3 – 5,0.

Вариант № 3. Сахароза – 30; KH2PO4 – 10; MgSO4•7H2O – 10; (NH4)2SO4 – 10; KCl – 0,5; FeSO4 – 0,01; ZnSO4 – 0,05.

Ферментационная глюкозоминеральная среда, (г/л):

Вариант № 4. Глюкоза – 30; аспарагин – 1,0; NH4NO3 –0,6; KH2PO4 – 1,0; MgSO4•7H2O – 0,5.

Вариант № 5 Глюкоза – 30; аспарагин – 2,0; KH2PO4 – 1,0; MgSO4•7H2O – 0,5; CaCO3 – 5,0.

Вариант № 6. Глюкоза – 95,0; NH4Cl – 2,0; KH2PO4 – 1,0; MgSO4•7H2O – 0,2; ZnSO4 – 0,01; MnSO4 – 0,005.

Ферментационная среда готовится в количестве 100 мл в колбах на 500 мл. Посевная среда добавляется из расчета 10% к ферментационной среде. Культивирование проводится на качалке 200 об/мин t= 28-29оС в течение 7-8 суток.

Стерилизуют среды в автоклаве при 0,5 ати в течение 30 мин.

Определение рН посевной и ферментационной сред

И доведение до рН 7,0

рН среды определяется потенциомтерически. В качестве титровальных растворов используются 10%-ные растворы NaOH и H2SO4.

Определение сухих веществ по рефрактометру

В оставшейся после розлива в колбы исходной среде определяется содержание сухих веществ по рефрактометру. Для этого 10-12 мл среды, при необходимости, профильтровывают через складчатый фильтр в пробирку, доводят температуру фильтрата до 20оС и производят замер показаний на рефрактометре.

Определение содержания сахара по методу Бертрана