Количественное определение ферментативной активности

В отличие от низкомолекулярных органических и неорганических веществ ферменты присутствуют в клетках в чрезвычайно малых количествах, поэтому определение их содержания в тканевых экстрактах или биологических жидкостях представляет собой особую проблему. Тем не менее, были разработаны весьма чувствительные и специфические методы определения каталитической активности различных ферментов,на основе которых можно судить о количестве того или иного фермента в биологическом объекте.

Для оценки количества фермента в образце тканевого экстракта или биологической жидкости, измеряют скорость реакции, катализируемой присутствующим в образце ферментом. Скорость ферментативной реакции рассчитывают либо по исчезновению исходных веществ, подвергающихся каталитическому воздействию, либо по образованию и накоплению продуктов в единицу времени. В определенных условиях измеряемая скорость реакции пропорциональна количеству присутствующего фермента. Поскольку при этом трудно определить число молекул фермента в пробе или их общую массу, результаты выражают в условных единицах активности фермента. Единицы активности удобнее всего представлять в микро молях (мкмоль, 10^–6 моль), нано молях (нмоль, 10^–9 моль) или пико молях (пмоль, 10^–12 моль) израсходованного субстрата или образовавшегося продукта в единицу времени (например, мкмоль/сек или нмоль/мин). Общепринятыми международными обозначениями единиц активности ферментов, соответственно, являются mU, nU и pU.

Факторы, влияющие на активность ферментов

На активность ферментов и, соответственно, скорость ферментативной реакции влияют, в основном, следующие физико-химические факторы: концентрация фермента [E₀] и субстрата [S], температура, значение показателя концентрации водородных ионов - рН, присутствие активаторов или ингиби­торов.