2015-06-26
653
1. Зависимость активности ферментов и неорганических катализаторов от температуры.
Сравнивают условия действия фермента амилазы и неорганического катализатора НСl. Амилаза гидролизует крахмал до декстринов и мальтозы. Декстрины с йодом дают окраску от сине-фиолетовой до желто-бурой (в зависимости от глубины расщепления). Мальтоза с йодом окраски не дает. НСl при кипячении гидролизует крахмал до мальтозы.
| Оборудование: | 1. | Штатив с пробирками. |
| 2. | Мерная коническая пробирка. | |
| 3. | Пипетки на 1 и 2 мл, глазная пипетка. | |
| 4. | Термостат. | |
| 5. | Водяная баня | |
| Реактивы: | 1. | 1% раствор крахмала.. |
| 2. | Раствор Люголя. | |
| 3. | Дистиллированная вода | |
| 4. | 10% раствор НСl. | |
| 5. | Амилаза слюны. |
Ход работы. Получение ферментного препарата амилазы слюны: ополаскивают рот водой, затем набирают 10-20 мл дистиллированной воды, выдерживают во рту 2-3 мин и полученный раствор амилазы сливают в стакан.
В 3 пробирки наливают по 2 мл 1% раствора крахмала, в первую добавляют 1 мл амилазы, во вторую и третью – по 1 мл 10% НСl. Первую и вторую помещают в термостат при 37ОС на 10 мин, третью – в хорошо кипящую баню. Через 10 мин все пробирки вынимают и охлаждают холодной водой. Добавляют в них по 6 капель раствора Люголя, сравнивают окраску и делают выводы.
2. Зависимость активности амилазы от температуры.
| Оборудование: | 1. | Штатив с пробирками. |
| 2. | Мерная коническая пробирка. | |
| 3. | Пипетки на 1 и 2 мл, глазная пипетка. | |
| 4. | Термостат. | |
| 5. | Водяная баня | |
| 6. | Лед. | |
| Реактивы: | 1. | 1% раствор крахмала.. |
| 2. | Раствор Люголя. | |
| 3. | Дистиллированная вода | |
| 4. | 0,1 Н раствор Н2SO4. | |
| 5. | Амилаза слюны. |
Ход работы. В 4 пронумерованные пробирки наливают по 0,5 мл амилазы. Пробирку №1 ставят в лед, №2 – в термостат при 370С, №3 – оставляют при комнатной температуре, №4 – в кипящую водяную баню. Через 5 минут, когда содержимое пробирок примет нужную температуру, в пробирку №1 добавляют 2 мл 1% раствора крахмала, охлажденного до температуры тающего льда, во 2-ю, 3-ю и 4-ю пробирки добавляют по 2 мл крахмала комнатной температуры. Во все пробирки сразу же добавляют по 2 капли раствора Люголя и помещают в те же самые условия. После исчезновения окраски в пробирке №2 все их вынимают и добавляют в каждую по 1 мл 0,1Н серной кислоты для прекращения действия фермента. Активность амилазы оценивают по конечной окраске содержимого пробирок. Чем выше активность фермента, тем слабее окраска. По полученным результатам построить график зависимости активности амилазы от температуры.
