Унифицированный метод определения общего холестерина

(метод Илька)

Принцип метода: Присутствующий в плазме или сыворотке крови холестерин и его эфиры дают цветное окрашивание при обработке смесью уксусного ангидрида, серной и уксусной кислот.

Реактивы:

1. Ледяная уксусная кислота.

2. Концентрированная серная кислота.

3. Уксусный ангидрид.

4. Абсолютный спирт.

5. Кислотная смесь: в сухую колбу наливают 10 мл ледяной уксусной кислоты и 50 мл уксусного ангидрида, затем при постоянном перемешивании и охлаждении добавляют 10 мл концентрированной серной кислоты.

6. Калибровочный раствор: 232 мг холестерина растворяют в 2-3 мл хлороформа и доводят до объема 100 мл абсолютным спиртом. Раствор содержит холестерин в концентрации 6 ммоль/л.

Ход определения: К 2,1 мл кислотной смеси медленно по стенке пробирки добавляют 0,1 мл плазмы или сыворотки без гемолиза, перемешивают, ставят на 20 мин в термостат или водяную баню при 37°С, затем фотометрируют в кювете с длиной оптического пути 0,5 см при длине волны 625 нм.

Построение калибровочной кривой. К 0,05-0,2 мл калибровочного раствора добавляют такое же количество кислотной смеси, чтобы общий объем был 2,2 мл, перемешивают и выдерживают 20 мин при 37°С, так же как опытные пробы, а затем фотометрируют. Окраска калибровочной пробы, в которую взято 0,05 мл калибровочного раствора, соответствует содержанию холестерина в плазме 3 ммоль/л пробы, вкоторую взято 0,1 мл – содержанию 6 ммоль/л и т.д.