Способы очистки

1.мембранное фильтрование (микро и ультрафильтрация)

2. достижение изоэлектрической точки (создание рН – балластные белки выпадают в осадок)

3.хроматографические методы:

•гель-фильтрация: колонка заполнена сорбентом, белки с меньшей Мм сорбируются, с большей Мм проходят через нее.

•Ионно-обменная хроматография (ионно-обменные смолы – аниониты и катиониты)

•Гидрофобная хроматография: гидрофобные вещества сильнее связываются с сорбентом и выходят позднее

•Аффинная: 1 из компонентов смеси ковалентно связывается с лигандом, нарушая эту связь элюируют высокоочищенный белок.

4.кристаллизация: многократно повторяют при разных значениях рН, в конце достигая изоэлектрической точки.

5.электрофорез в полиакриламидном геле: используют перед кристаллизацией: определенный белок с определенной массой проходит через гель, а другой нет.

Стабилизация и пролонгирование препаратов инсулина.

Инсулин не стоек, но образует стойкий комплекс с 2-х валентными Ме, поэтому его стабилизуют цинком.

1.суспензия инсулин-протамина для иньекций (д/и): инсулин постепенно отделяется от протамина: эффект через 2-4ч, максимум 8-12ч, длится 16-18ч. Протамин сульфат+натрия гидрофосфат. Консервируется – м-крезолом, напагином с доб глицерином.

2.протамин-цинк-инсулин д/и: хлорид цинка + инсулин-протамин+натрия фосфат: 3-6ч/14-20ч/24-36ч.Конс фенолом.

3.суспензия цинк-инсулина аморфного д/и – 1ч/12ч (инсулин семилонг). ZnCl в ацетатном буфере. Консервируется фенолом.

суспензия цинк-инсулина кристаллического д/и 6ч/20ч/36ч (ультралонг)

суспензия цинк-инсулина д/и (смесь аморфного и кристаллического 3:7):

2ч/10ч/24ч, т.о. возможна одна инъекция в сутки (лонг).