Знание ИЭТ важно для разделения белков методом электрофореза

Как и аминокислоты белки при определенном значении pH имеют нейтральный заряд и такое значение pH называют изоэлектрической точкой белка. При pH ниже ИЭТ увеличивается положительный заряд, и молекула белка становится катионом. При pH выше ИЭТ увеличивается отрицательный заряд, и белок становится анионом. Для большинства белков ИЭТ находится в пределах 2,7-7,9.

Все несущие заряд частицы передвигаются в электрическом поле в зависимости от величины заряда. Постоянное электрическое поле можно получить, используя источники постоянного напряжения и пропуская постоянный ток через буферный раствор. Выбирая pH буферного раствора, можно управлять и характером распределения белков в электрическом поле. Скорость перемещения молекул, кроме того, зависит от целого ряда факторов. Важно присутствие других ионов, температуры, молекул носителя, на котором проводится разделение, величины заряда самой белковой молекулы.

Метод разделения, учитывающий все указанные факторы, получил название электрофорез. Его применяют не только для разделения белков, но и для разделения любых частиц, имеющих заряд. Первые способы разделения белков использовали разделение в буферном растворе (электрофорез со свободной границей), а затем большее распространение получил электрофорез на носителях. Носителем служат полоски бумаги, ацетатцеллюлозы, агаровый, крахмальный, полиакриламидный гель, смоченные или содержащие буферный раствор.

В клинической практике наибольшую популярность приобрел электрофорез на ацетилцеллюлозных полосках для разделения белков плазмы крови (рис.1.7). Обычно белки плазмы в стадартных условиях электрофореза (буферный раствор pH 8.8) разделяются на 5 фракций. Полоски прокрашивают красителем, который количественно связывается с белками, что позволяет после извлечения краски количественно оценить электрофореграмму. Соотношение между отдельными фракциями меняется при разных заболеваниях.