Вектори на основі фага l

Бактеріофаг λ являє собою дволанцюгову молекулу ДНК довжиною приблизно 45 т.п.н., заключену в білковий капсид. Розвиток бактеріофага λ після проникнення в бактерію E.coli може відбуватись двома шляхами. Якщо має місце літичний цикл, то фаг інтенсивно розмножується і приблизно через 20 хв. клітина руйнується з утворенням фагових частинок. Якщо ж розвиток подій відбувається лізогенним шляхом, фагова ДНК інтегрує в хромосому бактерії у вигляді профагу та реплікується разом з нормальними бактеріальними генами. Під дією несприятливих умов (наприклад УФ-опромінення) профаг активується, і починається літичний шлях розвитку.

Вектори на основі фага l отримали широке розповсюдження. Фагові частинки здатні проходити літичний цикл розвитку всередині бактеріальних клітин і, відповідно, утворювати в популяції бактерій стерильні плями, при чому всі фагові частинки однієї плями є клоном ідентичних фагових частинок. Такі плями містять в концентрованому вигляді як самі фагові частинки, так і продукти метаболізму інфікованих бактеріальних клітин, що дозволяє ідентифікувати клоновані послідовності ДНК.

Існує декілька принципів конструювання векторів на основі фага l. В середині молекули l-ДНК довжиною»45т.п.н. міститься ділянка (»15т.п.н.), що не є необхідною для літичного розвитку бактеріофага, тому її можна замінити на фрагмент чужорідної ДНК і здійснити клонування шляхом розмноження рекомбінантного бактеріофага. Рекомбінантні ДНК, які містять фрагменти чужорідної ДНК, що не відповідають оптимальному розміру, не спаковуються і не клонуються. Фрагмент фагової ДНК обмежений з двох боків послідовностями полілінкера, що містять сайти рестрикції Еко RI, Ваm НI, Sal GI, в які вбудовуються фрагменти чужорідної ДНК. Ємність фагових векторів 15-25 т.п.н.