Інсемінація ооцитів і культивування ембріонів

Малюнок 2. Яйцеклітина, отримана в результаті пункції фолікулів у 25-річної жінки.

Малюнок 3. Яйцеклітина, отримана в результаті пункції фолікулів у 43-річної жінки.

Фолікулярну рідину, отриману в результаті пункції фолікулів, поміщаютьв чашку Петрі. Аспірат досліджують під стереомікроскопом з 10-50 кратним збільшенням. Отримані ооцити переносять в середовище для культивування. Чашку з ооцитами поміщають в CО2 -термостат, що підтримує необхідні параметри для культивування. Зазвичай ооцити залишають в термостаті на 4 - 6 годин до інсемінації. Як нативна, так і кріоконсервована сперма перед використанням має бути оброблена для того, щоб відмити сперматозоїди від плазми (і/або кріопротектора) і виділити фракцію морфологічно-нормальних і високорухливих сперматозоїдів. Нині існує декілька способів обробки сперми, з яких найбільшого поширення набули: центрифугування - флотація і центрифугування в градієнті щільності. До інсемінації суспензія сперматозоїдів знаходиться в інкубаторі не менше однієї години. Концентрація сперматозоїдів в інсемінаційному середовищі залежить від якості сперми і має бути не менше 10 тисяч в мілілітрі. Контроль запліднення зазвичай проводиться через 16 - 18 годин. В цей час зазвичай пронуклеуси чітко візуалізуються. Зиготи переносять у свіже культуральне середовище, де відбувається початковий розвиток ембріонів. Культивування ембріонів in vitro може тривати до стадії бластоцисти, яка формується у людини на 5-6 добу розвитку.